Анализ на чувствительность антибиотиков: как сдавать, посев, мазок и расшифровка

Расшифровка по типу возбудителя

Проведение анализа на чувствительность к антибиотикам необходимо и при неясной природе воспалительного процесса. Учитывая, что после приема антибактериальных препаратов, патогенные штаммы могут мутировать, изменять состояние, то микроорганизмы классифицируют на устойчивые, чувствительные, условно-чувствительные.

Клиницисты выделяют несколько видов интерпретаций.

Что значит чувствителен к антибиотикам?

Очень часто, перед тем как назначить лечение и выписать соответствующие лекарственные препараты, врачи проверяют человека на чувствительность к антибиотикам. Делается это несколькими методами.

Итак, выявление чувствительности или сопротивляемости микроорганизмов к антибиотикам необходимо для назначения правильного метода лечения. Так, например, если у возбудителей инфекции наблюдается резистентность к определенному препарату, то лечение им просто не будет оказывать должного эффекта. Различают несколько форм сопротивляемости:

чувствительные;
умеренно чувствительные;
устойчивые.

Чувствительные микроорганизмы погибают сразу же после введения небольших доз, а умеренно чувствительные – при определенных концентрациях. При этом устойчивые могут погибнуть только при взаимодействии с большим количеством антибиотика, который не может быть введен в организм, а, следовательно, необходимо искать альтернативный способ лечения и устранения заболевания.

Существует несколько способов определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам:

метод последовательных разведений в жидкой питательной среде;
метод диффузии в агар;
ускоренный метод.

Чаще всего проба на чувствительность к антибиотикам проводится по методу определения в физиологической жидкости. В этом случае используется процесс обработки интегрированных пластин с различной концентрацией антибиотиков. Таким методом определяют больных раком, для того чтобы подтвердить или опровергнуть эффективность назначенных препаратов при химиотерапии.

Анализ на чувствительность к антибиотикам по диффузионному методу почти так же распространен, как и первый. При этом он дает лишь качественный ответ, есть или нет сопротивляемость.

Благодаря развитию микробиологических технологий, появились ускоренные методы диагностики, которые дают полную и развернутую информацию. Это очень важно при назначении лекарственных препаратов, а также, когда время не терпит, и следует как можно быстрее приступить к лечению.

Случается иногда так, когда результатов и вышеуказанных методов исследования недостаточно. В этом случае выводят минимальную бактерицидную концентрацию, которая способна уничтожить возбудителя инфекции, только происходит это в течение определенного промежутка времени.

Анализ на чувствительность к антибиотикам является обязательным при возникновении у врача подозрений, что заболевание пациента имеет бактериальную природу. Это связано с тем, что медики пытаются контролировать назначение данных препаратов, чтобы не стимулировать мутации и не вызывать резистентность у микроорганизмов.

Анализ на чувствительность к антибиотикам – это лабораторный способ выявления препарата, который будет оказывать наибольшее действие на патогенную флору в данном конкретном случае болезни.

На данный момент антибактериальная терапия применяется достаточно широко там, где она нужна, а также в тех случаях, когда это совсем не обязательно, для перестраховки от возможных осложнений. Например, после кесарева сечения, лапароскопических операций, удаления конкрементов из почек или мочеточников и т. д.

Фармацевтическая промышленность может предложить широкий выбор препаратов как в плане цены, так и в плане действенности. Для того чтобы не «тыкать пальцем в небо» и назначить эффективный антибиотик, нужно провести посевы на чувствительность.

Перед тем как врач подберет терапию, пациенту необходимо сдать некоторые анализы. Посев на чувствительность к антибиотикам назначается, если необходимо определить лекарство, которое в данном случае будет наиболее уместно. Чаще всего это исследование назначается для лечения заболеваний, передающихся половым путем, или ЗППП. Для детей же необходимость в определении антибиотика – это обязательное условие.

Кроме того, определение чувствительности нужно, чтобы избежать устойчивости бактерий к лечению. Если пациента недавно лечили антибиотиками, и теперь вновь необходим повторный курс, то требуется замена препарата. Это позволит использовать меньшие дозы лекарства и не вызывать мутации у возбудителя. В гнойных хирургических отделениях антибиотики меняют каждые два-три месяца.

Данный анализ необходим еще в том случае, если на основную группу антибиотиков у больного возникает аллергическая реакция.

Анализ мочи на чувствительность к антибиотикам, и не только ее, можно провести несколькими способами. Первый из них – это метод дисков. Проводят его следующим образом. В чашку Петри заливают агар, а когда он застынет, специальным инструментом наносят исследуемый материал. Затем по поверхности агара раскладывают бумажные диски, пропитанные антибиотиками. После чашку закрывают и ставят в термостат. Постепенно диск погружается в желатин, а антибиотик диффундирует в окружающее пространство. Вокруг бумаги образуется зона «подавления роста». Чашки проводят в термостате двенадцать часов, затем их вынимают и измеряют диаметр вышеуказанной зоны.

Второй способ – это метод Е-теста. Он похож на предыдущий, но вместо бумажных дисков используют полоску, которая на своем протяжении в разной степени пропитана антибиотиком. После двенадцати часов экспозиции в термостате чашку Петри достают и смотрят, в каком месте зона подавления роста соприкасается с полоской бумаги. Это будет наименьшая концентрация препарата, которая необходима для лечения заболевания.

Достоинством этих тестов является быстрота и простота их проведения.

Анализ на флору и чувствительность к антибиотикам можно провести и другим способом. Этот метод основан на последовательном уменьшении концентрации антибиотика (от максимальной до минимальной) с целью определить, в какой из пробирок прекратится сдерживание роста бактерий.

Сначала подготавливают растворы препарата. Затем их вносят в жидкую среду с бактериями (бульон или агар). Все пробирки на ночь (то есть 12 часов) помещаются в термостат при температуре 37 градусов, а утром проводят анализ получившихся результатов. Если содержимое пробирки или чашки Петри мутное, это свидетельствует о росте бактерий и, следовательно, неэффективности антибиотика в данной концентрации. Первая пробирка, в которой визуально не будет определяться рост колоний микроорганизмов, будет считаться достаточной концентрацией для лечения.

Это разведение препарата принято называть минимальной подавляющей концентрацией (МПК). Она измеряется в миллиграммах на литр или микрограммах на миллилитр.

Анализ на чувствительность к антибиотикам нужно уметь не только правильно сделать, но и грамотно расшифровать. Основываясь на получаемых результатах, все микроорганизмы делят на чувствительные, умеренно резистентные и резистентные. Для того чтобы различать их между собой, используются условные пограничные концентрации препаратов.

Эти значения не являются постоянными и могут изменяться в зависимости от приспосабливаемости микроорганизмов. Разработкой и пересмотром этих критериев поручено заниматься химиотерапевтам и микробиологам. Одной из официальных структур такого рода является Национальный комитет по клиническим лабораторным стандартам США. Разработанные ими стандарты признаны во всем мире для использования в оценке активности антибиотиков, в том числе для рандоминизированных многоцентровых исследований.

Различают два подхода к оценке результатов анализа на чувствительность к антибиотикам: клинический и микробиологический. Микробиологическая оценка ориентируется на распределение эффективных концентраций антибиотика, а клиническая — на качество антибактериальной терапии.

Анализ — определение чувствительности антибиотикам — назначается с целью выявить чувствительные и устойчивые микроорганизмы.

Чувствительными называются возбудители, которые поддаются лечению антибиотиками в средней терапевтической концентрации. Если достоверная информация о категории чувствительности микроорганизма отсутствует, то учитываются данные, полученные в условиях лаборатории. Они совмещаются со знаниями о фармакокинетике используемого препарата, и после синтеза данной информации делается вывод о восприимчивости бактерий к лекарству.

К резистентным, то есть устойчивым, микроорганизмам относятся те бактерии, которые продолжают вызывать заболевания даже при использовании максимальных концентраций лекарственных веществ.

Промежуточную резистентность устанавливают в том случае, если заболевание в процессе лечения может иметь несколько исходов. Выздоровление пациента возможно в случае использования высоких доз антибиотиков либо в случае прицельного накапливания лекарства в месте инфекции.

Анализ на микрофлору и чувствительность к антибиотикам определяет такой показатель, как минимальная бактерицидная концентрация, или МБК. Это самая низкая концентрация препарата, которая в лабораторных условиях вызывает элиминацию практически всех микроорганизмов в течение двенадцати часов.

Знание этого показателя врачи используют, когда назначают терапию не бактерицидными, а бактериостатическими лекарственными средствами. Или в случаях, когда стандартная антибактериальная терапия оказывается неэффективной. Чаще всего этот анализ заказывают для больных с бактериальным эндокардитом, остеомиелитом, а также при оппортунистических инфекциях.

Анализ на чувствительность к антибиотикам может проводиться с использованием биологических жидкостей:

Кроме того, для определения местной чувствительности производят забор мазков из уретры, цервикального канала и верхних дыхательных путей.

метод последовательных разведений в жидкой питательной среде;.

Методы определения чувствительности к антибиотикам

Методы определения чувствительности бактерий к антибиотикам делятся на 2 группы: диффузионные и методы разведения.

Определение чувствительности бактерий к антибиотикам:

диффузионные методы

с использованием дисков с антибиотиками
с помощью Е-тестов

методы разведения

разведение в жидкой питательной среде (бульоне)
разведение в агаре

При определении чувствительности диско-диффузионным методом на поверхность агара в чашке Петри наносят бактериальную суспензию определенной плотности (обычно эквивалентную стандарту мутности 0,5 по McFarland) и затем помещают диски, содержащие определенное количество антибиотика. Диффузия антибиотика в агар приводит к формированию зоны подавления роста микроорганизмов вокруг дисков. После инкубации чашек в термостате при температуре 35 о -37 о С в течение ночи учитывают результат путем измерения диаметра зоны вокруг диска в миллиметрах (рис. 1).

Рисунок 1. Определение чувствительности микроорганизмов диско-диффузионным методом.

Определение чувствительности микроорганизма с помощью Е-теста проводится аналогично тестированию диско-диффузионным методом. Отличие состоит в том, что вместо диска с антибиотиком используют полоску Е-теста, содержащую градиент концентраций антибиотика от максимальной к минимальной (рис. 2). В месте пересечения эллипсовидной зоны подавления роста с полоской Е-теста получают значение минимальной подавляющей концентрации (МПК).

Рисунок 2. Определение чувствительности микроорганизмов с помощью Е-тестов.

Несомненным достоинством диффузионных методов является простота тестирования и доступность выполнения в любой бактериологической лаборатории. Однако с учетом высокой стоимости Е-тестов для рутинной работы обычно используют диско-диффузионный метод.

Методы разведения основаны на использовании двойных последовательных разведений концентраций антибиотика от максимальной к минимальной (например от 128 мкг/мл, 64 мкг/мл, и т.д. до 0,5 мкг/мл, 0,25 мкг/мл и 0,125 мкг/мл). При этом антибиотик в различных концентрациях вносят в жидкую питательную среду (бульон) или в агар. Затем бактериальную суспензию определенной плотности, соответствующую стандарту мутности 0,5 по MсFarland, помещают в бульон с антибиотиком или на поверхность агара в чашке. После инкубации в течение ночи при температуре 35 о -37 о С проводят учет полученных результатов. Наличие роста микроорганизма в бульоне (помутнение бульона) или на поверхности агара свидетельствует о том, что данная концентрация антибиотика недостаточна, чтобы подавить его жизнеспособность. По мере увеличения концентрации антибиотика рост микроорганизма ухудшается. Первую наименьшую концентрацию антибиотика (из серии последовательных разведений), где визуально не определяется бактериальный рост принято считать минимальной подавляющей концентрацией (МПК). Измеряется МПК в мг/л или мкг/мл (рис. 3).

Минимальная подавляющая концентрация (МПК) – наименьшая концентрация антибиотика (мг/л или мкг/мл), которая in vitro полностью подавляет видимый рост бактерий

Рисунок 3. Определение значения МПК методом разведения в жидкой питательной среде.

Однако с учетом высокой стоимости Е-тестов для рутинной работы обычно используют диско-диффузионный метод.

Показания

Бакпосев на микрофлору широко применяется в медицинской практике при диагностике инфекционно-воспалительных заболеваний (в гинекологии, урологии, венерологии, отоларингологии, хирургии и других областях), и при риске развития сепсиса (системной реакции на развивающееся воспаление). Анализ на чувствительность к антибиотикам позволяет выявить и вывести возбудителей следующих заболеваний:

бактериальный вагинит;
инфекционные ЗППП (заболевания, передающиеся половым путем);
хламидиоз;
гонорея;
трихомониаз;
цистит;
кишечная инфекция;
пневмония;
туберкулез;
ангина и мн. др.

При наличии показаний заболевания почек, повышенный уровень лейкоцитов в моче и др.

Прежде чем начать принимать антибиотик, проверь, поможет ли он тебе

Индивидуальный подбор эффективного антибиотика – залог победы над инфекцией

При инфекционных заболеваниях очень важно установить, к какому конкретно антибиотику чувствителен данный возбудитель, от этого зависит эффективность лечения.

Особенно это актуально в наши дни, когда многие возбудители проявляют резистентность (устойчивость) ко многим антибиотикам.

Бактериологическое исследование (посев на питательные среды, бакпосев) позволяет получить непосредственно культуру микроорганизма – возбудителя данной инфекции.

Выделив культуру, ее можно во-первых точно идентифицировать (определить вид микроба), а во-вторых определить ее чувствительность к лекарственным препаратам – антибиотикам и бактериофагам.

Этот тест (определение антибиотикочувствительности, «подтитровка антибиотиков» ) имеет важнейшее значение для последующего лечения, т.к. позволяет выбрать препарат, максимально подходящий для лечения конкретного возбудителя. Необходимость такого анализа связана с тем, что даже бактерии одного вида, но выделенные от разных людей, могут отличаться по спектру чувствительности.

Сегодня выпускаются десятки наименований антибиотиков, относящиеся по своему строению к различным группам. Выбрать из них оптимальный для лечения конкретного возбудителя – непростая задача, решить которую невозможно без лабораторного определения антибиотикочувствительности. Это касается всех инфекций – начиная от угрей и фурункулов и заканчивая инфекциями внутренних органов.

Характерная особенность современных возбудителей – частая встречаемость высокоустойчивых штаммов микроорганизмов. Например, бактерии семейства Enterobacteriaceae (к ним относятся такие распространенные возбудители как Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae) образуют ферменты БЛРС – беталактамазы расширенного спектра.

Эти ферменты нейтрализуют действие бета-лактамных антибиотиков (пенициллинов и цефалоспоринов). Устойчивость к антибиотикам сейчас повышается практически у всех возбудителей – стафилококков, энтерококков, стрептококков, синегнойной палочки и многих других. Что особенно тревожно – устойчивость может развиваться сразу к нескольким типам (классам) антибиотиков, такие возбудители называются полирезистентные.

Хотя арсенал антибиотиков, казалось бы, широк, подобрать «работающий» препарат врачам становится всё сложней. Именно поэтому определение антибиотикограммы становится необходимым исследованием для лечения инфекций.

В ходе бактериологического исследования в компетентных лабораториях проводят сначала выделение возбудителей из клинического материала, а затем у каждого из них определяют чувствительность к набору антибиотиков. Это дает информацию лечащему врачу, какие антибиотики будут эффективны, какие будут бесполезны в данном конкретном случае.

В лабораторной практике нередки случаи, когда возбудитель устойчив почти ко всем протестированным антибиотикам, за исключением 1-2 препаратов. Потраченные на анализ время и деньги окупятся гораздо быстрее, чем длительное лечение неэффективным лекарством.

Традиционный подход (сначала назначаем лечение, потом диагностируем) постепенно уходит из практики. Препараты широкого спектра, на которые привыкли надеяться лечащие врачи, все чаще дают сбои, в силу распространения высокоустойчивых штаммов. Кроме того, лечение неэффективным антибиотиком ведет к тому, что нормальная микрофлора организма сильно страдает, а патогенная флора адаптируется к антибиотикам, приобретает устойчивость, и вылечить такую инфекцию в дальнейшем будет крайне сложно.

Самолечение антибиотиками без определения антибиотикограммы ведет к «наработке» в организме штаммов с повышенной устойчивостью, которые впоследствии могут вызвать еще более серьезное заболевание. И лечить его будет гораздо сложнее.

Также целесообразно определение чувствительности возбудителей к бактериофагам – препаратам вирусной природы, имеющим ряд преимуществ по сравнению с антибиотиками и хорошо себя зарекомендовавшим при лечении ряда заболеваний. Однако разные микробы по-разному восприимчивы к бактериофагам, которые также выпускаются в различных вариантах. Здесь опять на помощь приходит бактериологическое исследование, однако не все лаборатории определяют чувствительность к бактериофагам.

Определение чувствительности к антибиотикам и бактериофагам рекомендуем Вам провести в диагностическом центре «Финист».

Причем это входит в стандартное бактериологическое исследование (бакпосев), доплачивать дополнительно ничего не придется.

В «Финисте» можно провести бакпосев практически любого биоматериала (мазки с кожи и слизистых, урогенитальные образцы, моча, кал на дисбактериоз и т.д.). Все выделенные из материала возбудители будут происследованы на чувствительность к антибиотикам и бактериофагам.

Бактериологическое исследование в «Финисте» помогает нашим пациентам точно диагностировать возбудителя инфекции, и индивидуально определять наиболее эффективный препарат для лечения.

Все исследования проводятся высокопрофессиональными микробиологами с многолетним стажем лабораторных исследований.

Препараты широкого спектра, на которые привыкли надеяться лечащие врачи, все чаще дают сбои, в силу распространения высокоустойчивых штаммов.

Гинеколог – консультации онлайн

Количество скудный рост 10 2-10 3.

Метод последовательных разведений

Состоит в подготовке питательных сред, содержащих различное количество антибиотика. Их разливают в разные чашки Петри, каждую из которых снаружи разделяют на сектора при помощи маркера. На каждый сектор наносят разные культуры при помощи специальной петли или аппликатора. В каждую чашку можно за один раз посеять 10-15 культур. Чашки культивируют в термостате. Контрольную чашку заливают агаром без антибиотика.

Определение чувствительности этим методом дает возможность выявить минимальные количества антибиотика, полностью подавляющие рост бактерий.

Состоит в подготовке питательных сред, содержащих различное количество антибиотика.

Прежде чем начать принимать антибиотик, проверь, поможет ли он тебе

Индивидуальный подбор эффективного антибиотика – залог победы над инфекцией

Это касается всех инфекций начиная от угрей и фурункулов и заканчивая инфекциями внутренних органов.

Что означает повышенное содержание бактерии E. coli

Любой микроорганизм, обнаруженный в моче, — симптом какого-то заболевания. Иногда не совсем понятно, как и откуда кишечная палочка проникает в мочу, причины явления весьма разнообразны.

Количественный результат важен не только для определения степени обсемененности, но и контроля правильности проводимого лечения.

Показания и материал

Для того чтобы определить степень чувствительности к антибиотикам для начала стоит изучить при каких показаниях нужно сдавать анализы. Часто исследование крови при приеме антибиотиков проводится при инфекционных патологиях. Особенно часто к этому методу прибегают в гинекологии, урологии, хирургии, онкологии, отоларингологии и в других областях медицины

Главным показанием для проведения исследования считаются патологии с воспалительным характером внутренних органов и систем, а также признаки сепсиса.

Для исследования восприимчивости организма к антибиотикам можно сдавать разный материал:

кровь. Биохимический анализ крови помогает оценить общее состояние организма. Кровь должна быть стерильна, поэтому она берется в лаборатории;
урина или моча. При исследовании этого материала определяется бактериальная микрофлора половой системы;
кал. При помощи исследования кала врач может оценить состояние пищеварительной системы;
сперма, секрет простаты, слизь из уретры. Исследование этого материала помогает определить, какой возбудитель вызвал проблемы в мочеполовой системе у мужчин;
мокрота. Исследование мокроты помогает вывить возбудителя заболеваний дыхательной системы.

Не рекомендуется проводить исследование крови при приеме любые лекарственных средств.

Гинеколог – консультации онлайн

РЕЙТИНГ ВРАЧЕЙ.

Как сделать пробу на антибиотик?

Наиболее популярным качественным методом диагностики считается диффузия в агар с использованием метода дисков. Для того, что бы изучить чувствительность к антибиотикам при помощи диффузии с дисками, необходимо засеять исследуемым патогенном питательную среду с агаром и поместить сверху диски с антибактериальными препаратами. Далее, чашка Петри с образцами выдерживается в термостате при температуре от 35 до 37 0 С в течение суток. По истечению 24 часов оценивают зоны ингибирования роста бактерий вокруг дисков. Данный метод диагностики является качественным, то есть диффузия-дисками определяет — чувствителен возбудитель к антибиотику или нет.

Для оценивания степени чувствительности измеряют зону ингибирования роста. При полной резистентности бактерии к антибиотику зона задержки полностью отсутствует.

О слабой чувствительности говорит задержка до 1.5 сантиметра. Препараты с такими показателями являются неэффективными для эрадикации исследуемого возбудителя.

Умеренно эффективными (показатели стандартной чувствительности) являются антибиотики с задержкой роста от 1.5 до 2.5 сантиметров. О высокой чувствительности свидетельствует зона ингибирования роста более 2.5 сантиметров.

Кроме диско-диффузного метода могут применяться полоски E-тестов. Алгоритм действий аналогичен предыдущему, только вместо пропитанных противомикробным средством дисков используют полоску с Е-тестом, содержащую разметку с градиентом концентраций изучаемого антибиотика (от максимума к минимуму).

Полоски с Е-тестом

Важно помнить, что диффузные методы неэффективны для выявления МКП (минимальные концентрации подавления) полипептидных антибиотиков с плохой диффузией в агар. То есть для полимиксина, ристомицина и т.д. предпочтительнее использовать серийное разведение.

То есть для полимиксина, ристомицина и т.

Для чего это нужно

Микроорганизм, вызывающий бактериальную инфекцию излечивается только антибиотиками. Тест на чувствительность помогает определить к какому виду антибиотика микроб не стабилен, а к какому выработан стойкий иммунитет.

Крайне важно определить возбудителя и антибиотик во время беременности.

Стойкие влагалищные нарушения могут вызвать ряд патологий, а также усугубить послеродовой период.

Методы определения антибиотикочувствительности

Современная клиническая практика использует два основных принципа, на основании которых производится назначение антибактериальных средств – эмпирический и этиотропный.

Эмпирический (данные получены путем наблюдения или опыта) принцип основывается на накопленных знаниях о сущности и чувствительности бактерий, закономерности их роста, а также резистентности (сопротивляемости, выживаемости) микроорганизмов.
Этиотропный. При этиотропном принципе первоначально предполагается выявить флору, которая является возбудителем инфекции, а затем определить чувствительность бактерии к определенным антибиотикам.

Определение чувствительности флоры
Диско-диффузионный метод
Метод разведения
Ускоренные методы
Необходимость назначения теста
Выполнение анализа
Анализ мочи

Выполнение анализа.

Дополнительные методы выявления метициллинорезистентности

Наиболее надежным методом выявления метициллинорезистентнсти у стафилококков является непосредственное определение наличия гена mecA молекулярно-генетическими методами (с помощью полимеразной цепной реакции – ПЦР). Кроме того, разработан коммерческий метод выявления дополнительного пенициллиносвязывающего белка – ПСБ2а в реакции агглютинации.

В то же время скрининг на агаре для выявления метициллинорезистентности является высоко чувствительным и специфичным методом, легко выполнимым в условиях рутинной работы микробиологической лаборатории, однако он может быть использован только для штаммов S.aureus.