Диагностика пневмококковой инфекции

Пневмококковый сепсис

Пневмококковый сепсис проявляется инфекционно-токсическим синдромом (температура, слабость, головные боли), увеличением селезенки (что больной часто не чувствует), симптомы поражения различных органов и систем (легких, сердца, кишечника, почек, мозговых оболочек).

Отличить пневмококковую инфекцию от заболеваний со схожей клиникой, вызванных другими бактериями, очень сложно.

Лабораторная диагностика пневмококковой инфекции

Видовая идентификация пневмококков

Дифференциально-диагностические признаки пневмококков

И зеленящих стрептококков

ВидФерментация инулинаПризнак растворяющее действие 10-40% раствора желчиИнгибирующее действие оптохина 1:500 000
Пневмококки Стрептококки+ –+ –+ –

Чистую культуру засевают на агар, содержащий 1:50000-1:100000 оптохина. На следующие сутки учитывают результат. Пневмококки не растут в присутствии оптохина. Можно использовать бумажные диски 6 мкг оптохина, которые накладываются после посева на поверхность среды (посев лучше производить секторами). У пневмококков вокруг диска образуется зона задержки роста не менее 5 мм.

Основан на способности 10% желчи и 2% раствора оксидолатов лизировать пневмококк.

Вопросы для обсуждения

1. Морфология, тинкториальные и культуральные свойства пневмококков.

2. Заболевания человека, вызываемые пневмококками.

3. Антигенная структура пневмококков.

4. Лабораторная диагностика пневмококковых заболеваний.

5. Специфическая профилактика пневмококковых инфекций.

Самостоятельная работа студентов

1. Познакомиться со схемой исследования при пневмококковых инфекциях.

2. Микробиологический диагноз пневмококковых инфекций:

а. изучить демонстрационный препарат из чистой культуры пневмококка, зарисовать;

б. изучить рост пневмококка на кровяном агаре и МПБ;

в. сделать посев мокроты на чашку с кровяным МПА;

г. приготовить мазок из мокроты, окрасить его по Граму, зарисовать;

д. определить чувствительность к антибиотикам по демонстрационным посевам.

Схема микробиологических исследований

При пневмококковых инфекциях

МатериалМетод исследованияРезультат
Мокрота, гной, эксудат из плевраль-ной полости, слизь из гортани, носоглот-ки1. Микроскопический 2. Бактериологический посев на 5% кровяной агар А. Микроскопия мазков из колоний Б. Выделение чистой культуры 1. Микроскопический Культуралъное определение 2. Биохимическая активность тест с желчью ферментация глюкозы, сахарозы инулина 3. Биологический А. Заражение белых мышей с последующим вскрытием и приготовлением мазков-отпечатков. Б. Реакция агглютинации 4. Серологический Определение типа пневмококка в РА с противопневмококковыми сывороткамиГр+ кокки Мелкие, округлые, кусочные колонии с гемолизом Гр+ кокки Гр+ кокки Гемолитические колонии + Ферментация до кислоты, без образования газа Гр+ кокки +РА +РА

Заключение: в материале обнаружен S. pneumoniae.

Цель занятия: выработать навыки лабораторного анализа менингококковых инфекций.

1. Изучить биологические свойства возбудителя менингококковых инфекций.

2. Знать патогенетические факторы микроорганизмов.

3. Освоить методы лабораторной диагностики.

· интерпретировать полученные результаты лабораторной диагностики менингококковых заболеваний;

· оценить результаты антибиотикограммы и факторов персистенции;

· подобрать препараты для профилактики и лечения заболеваний.

Семейство Neisseriaceae объединяет группу аэробных парных кокков и парных палочек, семейство включает 4 рода: Neisseria, Moraxella, Branhamella, Acinetobacter.

В род нейссерия включено 6 видов, которые выделяются от человека: патогенные виды N. meningitidis, N. gonorrhaeae и непатогенные N. mucosa, N. sicea, N. subflava, N. flavescens. Непатогенные нейссерии являются кoмвeнcaлaми. У ослабленных больных признана их роль в развитии менингитов, эндокардитов, сепсиса, пневмоний, отитов и синуситов, бронхиальной астмы.

РазделВопросы для изучения
Биология возбудителя1. Таксономия Возбудитель менингококковых инфекций относится к семейству Neisseriaceae, роду Neisseria, включающему 6 видов. 2. Основные биологические свойства: Морфологические – бобовидные клетки диаметром 0,6-0,8 мкм, располагающиеся парами или тетрадами, нередко внутри лейкоцитов – незавершенный фагоцитоз. Спор не образуют, способны образовывать капсулу. Тинкториальные – грамотрицательные клетки. Культуральные: строгие аэробы. Температурный oптимyм –37 0 C, оптимальная реакция среда pH = 7,2-7,4. На обычных питательных средах не растут, для роста необходимо добавление сыворотки. Колонии на плотных питательных средах нежные, прозрачные, размером 2-3 мм. На сывороточном бульоне образуют помутнение и небольшой осадок на дне. Биохимические свойства. Ферментируют глюкозу, мальтозу с образованием кислоты без газа. Не разжижают желатин, оксидазоположительны. Патогенность 1. Факторы адгезии и колонизации: пили, белки наружной мембраны, капсула, которая является главным фактором патогенности менингококков. 2. Токсины и ферменты агрессии, гиалуронидаза, нейраминидаза, протеазы, плазмокоагулаза, фибринолизин, гемолизин, антилизоцимная активность. Антигенные свойства: У менингококков имеются 4 антигенные системы: 1. Капсульные полисахаридные антигены; 2. Белковые антигены наружной мембраны; 3. Белковый антиген, общий для всего рода; 4. Липополисахаридный антиген, включающий 8 серотипов. В соответствии с этим антигенная формула менингококков имеет следующий вид: серогруппа: серотип по белку: субтип по белку: серотип по ЛПС.
ЭпидемиологияИсточником инфекции может быть только человек: больной, реконвалесцент или бактерионоситель. Распространение инфекции происходит воздушно-капельным путем.
ПатогенезВходными воротами инфекции является носоглотка, откуда менингококкоки проникают в лимфатические сосуды и кровь, развивается бактериемия. Затем микроорганизмы внедряются в мозговые оболочки. Менингококки могут вызывать следующие формы болезни: нозофарингит, менингококцемия (менингококковый сепсис), эпидемический цереброспинальный менингит (гнойное воспаление мозговых оболочек головного и спинного мозга)
Постинфекци-онный иммунитетПосле перенесенной болезни формируется прочный длительный антимикробный иммунитет против всех серогрупп менингококков. Видоспецифический.

Этиотропная терапия менингококковой инфекции проводится сульфа-ниламидами или пенициллином G, а у людей с аллергией к пенициллину – хлорамфениколом.

Если быстрые методы диагностики не позволяют предварительно идентифицировать возбудителя или по каким-либо причинам происходит задержка с выполнением люмбальной пункции, то антибактериальная терапия назначает­ся эмпирически, не позднее 2-3 часов с момента установления диагноза. Выбор антибиотиков в данной ситуации диктуется необходимостью перекрыть весь спектр возможных возбудителей.

Специфическая профилактикапроводится по эпидемиологическим по­казаниям или военнослужащим – химической менингококковой вакциной, со­держащей полисахаридные антигены серогрупп А и С (активный антимикробный иммунитет), или человеческим нормальным иммуноглобулином (пассив­ный антимикробный иммунитет).

Методы изучения нормальной микрофлоры

Для изучения нормальной микрофлоры применяют два метода; бактериоскопический и бактериологический.

Бактериоскопический метод. Имеет большое самостоятельное значение для тех биотопов организма человека, в которых обитает большое количество различных видов микроорганизмов (полость рта. кишечник, вагина). Он позволяет получить общее представление о составе микрофлоры (преобладание грам/+ или грам/- бактерий той или иной формы – кокки, диплококки, стрептококки, палочки, бациллы, стрептобациллы, фузиформные бактерии, наличие грибов и т.д.), а также выявить те микроорганизмы, которые не удается культивировать на питательных средах. Бактериологический метод. Применяют для биотопов с широким спектром микроорганизмов (полость рта, кишечник, вагина), выполняют с учетом данных бактериоскопии.

Основные принципы бактериологического исследования:

а) использование качественной (видовой состав) и количественной

(количественное соотношение разных видов) оценки микрофлоры; 6) первичный посев материала без предварительного обогащения, так как

обогащение нарушает количественные соотношения видов; в) использование большого набора различных питательных сред, подбор

условий культивирования (аэробные, анаэробные, атмосфера СО2 и т.д.). Методы взятия материала для исследования:

Видовая идентификация пневмококков.

Общие сведения

Пневмококковая пневмония – форма пневмококковой инфекции, протекающая в виде очаговой бронхопневмонии или крупозной плевропневмонии. Пневмонии пневмококковой этиологии лидируют в структуре бактериальных пневмоний. Считается, что S. Pneumoniae вызывает около 30% внегоспитальных и 5% внутрибольничных пневмоний. Наибольшая заболеваемость отмечается среди детей до 5 лет и взрослых старше 60 лет. Примерно в четверти случаев пневмококковые пневмонии протекают с тяжелыми легочными (плеврит, абсцесс легких, эмпиема плевры) и внелегочными (перикардит, артрит, сепсис) осложнениями.

До начала эры пенициллина летальность от пневмококковой пневмонии превышала 80%, в настоящее время благодаря вакцинации и антибиотикотерапии этот показатель существенно снизился. Тем не менее, уровни заболеваемости, осложненного течения и смертности остаются высокими, что обусловливает повышенную настороженность специалистов в области педиатрии и пульмонологии в отношении пневмококковой пневмонии.

Категорию риска, наиболее восприимчивую к пневмококковой пневмонии, составляют дети до 2-х лет, пожилые люди в возрасте старше 65 лет, иммунокомпрометированные пациенты, лица с аспленией, страдающие алкоголизмом и табачной зависимостью.

Дополнительные материалы

По статистике до 70 всех пневмоний, около 25 средних отитов, 5-15 гнойных менингитов, около 3 эндокардитов вызываются пневмококком S.

Streptococcus pneumoniae, ДНК [реал-тайм ПЦР]

Выявление возбудителя стрептококковой инфекции (Streptococcus pneumoniae), в ходе которого с помощью метода полимеразной цепной реакции (ПЦР) определяется генетический материал (ДНК) пневмококка в образце биоматериала.

Пневмококк, Вейксельбаума диплококк, Френкеля диплококк.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР).

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Венозную кровь, мазок из зева (ротоглотки), мазок из носоглотки, мокроту, плевральную жидкость, ликвор.

Как правильно подготовиться к исследованию?

  • Рекомендуется употребить большой объем жидкости (чистой негазированной воды) за 8-12 часов до сбора мокроты.
  • За 3-4 часа до взятия мазков из ротоглотки (зева) не употреблять пищу, не пить, не чистить зубы, не полоскать рот/горло, не жевать жевательную резинку, не курить. За 3-4 часа до взятия мазков из носа не закапывать капли/спреи и не промывать нос. Взятие мазков оптимально выполнять утром, сразу после ночного сна.
  • Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Streptococcus pneumoniae (пневмококк) – грамположительный диплококк, являющийся основным возбудителем внебольничной пневмонии. Также этот микроорганизм может вызывать менингит и сепсис. Имеются данные о роли пневмококка в развитии и прогрессировании бронхиальной астмы и хронического бронхита.

Наиболее подвержены стрептококковой пневмонии и менингиту люди со сниженным иммунным статусом: дети, пожилые люди, ВИЧ-инфицированные, страдающие алкоголизмом и наркоманией.

Существует несколько лабораторных методов выделения пневмококка: бактериологический (посев мокроты на питательные среды), микроскопия мокроты и выявление генетического материала (ДНК) S. pneumoniae методом полимеразной цепной реакции.

Достаточно часто образец мокроты оказывается неинформативным, а результат его окраски по Граму – ложноотрицательным. Результат бактериологического метода может быть получен только через несколько дней, что затрудняет диагностику и откладывает начало специфической терапии. В отличие от этих методов, ПЦР обладает высокой чувствительностью и специфичностью и позволяет получить точный результат в максимально короткие сроки после доставки образца в лабораторию. ПЦР не требует наличия большого количества жизнеспособных микроорганизмов в образце биоматериала, так как определяется не сам микроорганизм, а его генетический материал. Данное преимущество позволяет устанавливать этиологию заболевания на фоне начатой антибактериальной терапии. Также полностью исключены ложноположительные результаты.

Так как S. pneumoniae – представитель нормальной микрофлоры верхних и нижних отделов дыхательных путей большинства людей, для диагностики пневмококковой пневмонии требуется не только обнаружение этого микроорганизма в мокроте, но и наличие дополнительных клинических и лабораторных признаков инфекционно-воспалительного процесса в органах дыхания. Например, S. pneumoniae, выявленный в мокроте пациента без клинических признаков инфекционного поражения легких, без отклонений в анализе крови и без изменений на рентгенограмме, следует рассматривать как нормального представителя микрофлоры дыхательных путей.

Для чего используется исследование?

  • Для диагностики инфекционных (пневмонии, хронического бронхита) и инфекционно-аллергических заболеваний легких.

Когда назначается исследование?

  • симптомов типичной внебольничной пневмонии (лихорадка, одышка и боль в грудной клетке, кашель с отхождением мокроты оранжевого цвета (“ржавой” мокроты);
  • симптомов обострения хронического бронхита (кашель с мокротой на фоне повышения температуры тела, усиления потливости, недомогания).

Что означают результаты?

Референсные значения: отрицательно.

  • пневмококковая пневмония;
  • обострение хронического бронхита.
  • отсутствие пневмококковой инфекции.

Что может влиять на результат?

  • Большинство людей является бессимптомными носителями пневмококка в верхних и нижних отделах дыхательных путей, поэтому результат исследования следует интерпретировать с учетом других клинических и лабораторных признаков заболевания.



Кто назначает исследование?

Врач общей практики, пульмонолог, инфекционист, педиатр, аллерголог.

Литература

  • Blaschke AJ. Interpreting assays for the detection of Streptococcus pneumoniae. Clin Infect Dis. 2011 May;52 Suppl 4:S331-7.
  • Waterer G, Rello J. Why should we measure bacterial load when treating community-acquired pneumonia? Curr Opin Infect Dis. 2011 Apr;24(2):137-41.
  • Korppi M. Bacterial infections and pediatric asthma. Immunol Allergy Clin North Am. 2010 Nov;30(4):565-74.
  • Schwerk N, Brinkmann F, Soudah B, Kabesch M, Hansen G. Wheeze in preschool age is associated with pulmonary bacterial infection and resolves afterantibiotic therapy. PLoS One. 2011;6(11):e27913. Epub 2011 Nov 29.

Не курить в течение 30 минут до исследования.

Пневмококковая инфекция

Пневмококковая инфекция обусловлена патогенным микроорганизмом Streptococcus pneumoniae. Этот возбудитель является главной причиной острых внебольничных пневмоний, занимает ведущее место в этиологии бактериальных менингитов, острых средних отитов, синуситов, вызывает первичный сепсис, заболевания кожи, суставов и другие инфекции, пневмококки являются этиологической причиной пневмонии в 20–75% случаев. Риносинусит имеет пневмококковую этиологию в 20–43% случаев, средний отит – 30–50%.

Читайте также:  До какого числа вакцинация от гриппа

Ежегодно в США диагностируется около 4 млн. случаев внебольничной пневмонии и более 3 млн. в странах Европейского союза. В России число таких больных превышает 1,5 млн. человек в год, а заболеваемость составляет 14–15 случаев на 1000 населения. По данным Министерства обороны РФ у военных срочной службы в течение 2000–2003 гг. заболеваемость пневмонией превышала показатель 40 случаев на 1000 военнослужащих.

Заболеваемость пневмококковым менингитом в США определяется на уровне 1–2 случая на 100 тыс. населения с уровнем летальности 19–46% в различных возрастных группах. В России, по данным Референс-центра по надзору за гнойными бактериальными менингитами за 2010 г., общий уровень заболеваемости составил 0,19 на 100 тыс. населения (с колебаниями по Федеральным округам от 0,11 до 0,30 на 100 тыс. населения), с летальностью 13%.

В тоже время, пневмококк относится к нормальным обитателям ротоглотки и частота здорового носительства в популяции может достигать 40–70%. При этом возможно как одновременное носительство различных серотипов пневмококка, так и смена одного серотипа другим в течение непродолжительного времени. Заболевание пневмонией, отитом, синуситом, как правило, возникает при попадании микроба в нижние или верхние дыхательные пути на фоне нарушения защитных механизмов организма человека (снижение уровня общего и местного иммунитета, нарушение мукоцилиарного клиренса и др.). При генерализации процесса развивается сепсис, менингит, абсцессы внутренних органов, поражения сердца (эндокардит), почек, суставов.

Резервуаром пневмококковой инфекции является человек. Вместе с тем, пневмококковая патология встречается у диких и домашних копытных животных (овец, коз, телят и т. д.), преимущественно в виде пневмонии или сепсиса. Выделенный возбудитель от животных не отличается по свойствам от пневмококка, вызывающего заболевание у людей.

Основной путь передачи инфекции – воздушно-капельный, иногда контактный. Отмечены случаи внутриутробного заражения. Пик заболеваемости приходится на холодные сезоны года и носит спорадический характер. Среди заболевших преобладают мужчины. Наиболее уязвимыми возрастными контингентами являются дети до 5 лет и лица пожилого возраста (старше 65 лет). Пневмококковая инфекция наиболее тяжело, с генерализацией инфекционного процесса, протекает у лиц старших возрастов, особенно при наличии сопутствующих хронических патологий (хроническая обструктивная болезнь легких, злокачественные новообразования, алкоголизм, сахарный диабет, заболевания сердечно-сосудистой системы, почек и печени и др.), а также иммунодефицитов различного генеза.

Показания к обследованию. Пациенты при подозрении на крупозную пневмонию, острый бронхит; отит, синусит; менингит, менингоэнцефалит; септическое состояние; поражения кожи, подкожной клетчатки, соединительной ткани (редкая локализация инфекции); конъюнктивит (редкая локализация инфекции).

Дифференциальная диагностика проводится с микробными агентами:

    при подозрении на внебольничную пневмонию: Haemophilus influenzae, Chlamydia pneumoniae, Mycoplasma pneumoniae, Legionella pneumophila, Staphylococcus aureus, семейством Enterobacteriaceae, вирусами гриппа;
  • при отитах, синуситах – Haemophilus influenzae, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Moraxella catarrhalis, Streptococcus pyogenes, дрожжевыми грибами рода Candida;
  • при менингите – Neisseria meningitides, Haemophilus influenzae тип b, Staphylococcus aureus, семействомEnterobacteriaceae;
  • при поражениях кожи, подкожной клетчатки, соединительной ткани – Streptococcus pyogenes, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa.

Материал для исследования

  • Мокрота, БАЛ, пунктаты (при подозрении на пневмонию); гнойное отделяемое, пунктаты (средний отит, синусит); СМЖ, кровь (менингит, менингоэнцефалит); кровь (септические состояния); отделяемое из раны (кожные поражения); секционный материал – культуральные исследования, выявление ДНК микроорганизма;
  • СМЖ – определение АГ;
  • сыворотка крови – определение АГ, АТ.

Этиологическая лабораторная диагностика включает выявление пневмококков методом микроскопии, посев исследуемого материала с дальнейшей культуральной и биохимической идентификацией возбудителя, определением антибиотикочувствительности; обнаружение специфических генетических фрагментов пневмококка и его АГ, обнаружение специфических АТ.

Сравнительная характеристика методов лабораторной диагностики и особенности интерпретации их результатов. Микроскопические исследования используют для выявления пневмококков в разных видах биологического материала: мокроте, плевральной жидкости, отделяемом из уха, придаточных пазух, СМЖ, крови. Диагностическая ценность обнаружения в мазке мокроты диплококков «сходных с пневмококками» до сих пор остается дискуссионной. Большинство исследователей считают, что это исследование может использоваться только при соблюдении ряда жестких условий:

  • взятие материала должно проводиться до начала антибиотикотерапии;
  • контроль правильности отбора, доставки и обработки материала:
    • задержка приготовления препарата на 2–5 ч от момента взятия материала может привести к ошибочным результатам;
    • подтверждением взятия образца мокроты из нижних отделов дыхательных путей служит выявление менее 10 эпителиальных клеток в поле зрения при малом увеличении микроскопа;
    • материал считается пригодным для бактериологического посева при обнаружении в мокроте большого количества нейтрофилов (более 25 в поле зрения), небольшого количества эпителиальных клеток (менее 10 в поле зрения) и преобладании монофлоры, по морфологии сходной с пневмококком.

Для посева с дальнейшей культуральной и биохимической идентификацией возбудителя, определением антибиотикочувствительности используют различные виды материала: мокрота, бронхоальвеолярный лаваж, отделяемое из уха и придаточных пазух, кровь, ликвор, плевральная жидкость.

При наличии роста на чашках проводится обязательная количественная оценка бактериального роста и выделение чистой культуры предполагаемого возбудителя для дальнейшей идентификации.

Принадлежность к виду Streptococcus pneumoniae подтверждается:

  • характерным видом колоний на средах, содержащих кровь (колонии по форме напоминают игральные шашки или блюдца, мелкие, прозрачные, окружены зоной зеленоватого гемолиза);
  • чувствительностью микроорганизма к оптохину;
  • чувствительностью к желчным кислотам;
  • положительной реакцией набухания капсулы с антипневмококковой omniсывороткой;
  • биохимической характеристикой возбудителя с использованием соответствующих наборов реагентов.

Оценка результатов культурального исследования. Для нестерильных локусов:

  • выявление при посеве в мокроте или лаважной жидкости более чем 10 3 КОЕ/мл пневмококков является диагностическим критерием постановки диагноза пневмония;
  • выявление в гнойном экссудате при остром бактериальном синусите более 10 5 КОЕ/мл пневмококков является диагностическим критерием постановки диагноза синусит;
  • выявление в гнойном отделяемом при остром среднем отите более 10 4 КОЕ/мл пневмококков, является диагностическим критерием постановки диагноза отит.

Для стерильных локусов:

  • любое выявление возбудителя в стерильных жидкостях организма служит основанием для постановки диагноза пневмококковой инфекции.

Для определения чувствительности к антибиотикам используются несколько методов.

  • Метод серийных разведений в бульоне или агаре. Принцип метода основан на оценке чувствительности возбудителя к серии последовательных разведений тестируемого антибиотика. При этом определяется точное значение минимальной подавляющей концентрации (МПК) препарата для микроорганизма. Однако изза значительной трудоемкости, метод используется преимущественно в научных лабораториях. Более широкое применение получил модифицированный метод серийных разведений, основанный на использовании пограничных концентраций антибиотика, который не дает точного определения МПК препарата для возбудителя, но позволяет оценить его принадлежность к чувствительным (S), промежуточно устойчивым (I) или резистентным (R) штаммам. Большинство готовых наборов реагентов используют именно этот принцип.
  • Диско-диффузионный метод – основан на оценке диаметра зоны подавления роста вокруг бумажного диска с антибиотиком, наложенного на растущую на плотной питательной среде культуру исследуемого микроорганизма. Образование зоны ингибирования роста происходит за счет диффузии антибактериального препарата из носителя (диска) в питательную среду, при которой величина диаметра ингибирования роста жестко связана с величиной МПК. Метод не определяет точное значение минимальной подавляющей концентрации антибиотика для микроорганизма, а только позволяет отнести его к одной из категорий чувствительности (S, I, R).
  • Метод эпсилометрии (Е-тест) – в качестве носителя используется полоска полимера, пропитанная различными концентрациями антибиотика, с нанесенными на нее значениями таких концентраций. Интерпретации результатов выполняют в соответствии с инструкцией к набору реагентов.

Наиболее важным при тяжелых пневмококковых инфекциях является определение чувствительности пневмококков к пенициллину и другим бета-лактамным антибиотикам (аминопенициллинам, карбапинемам, цефалоспоринам) – основным препаратам выбора. В качестве скринингового теста для определения чувствительности к этим препаратам используется диско-диффузионный метод.

В исследование обязательно включают изучение чувствительности к макролидам, линкозамидам, стрептограминам. Данные препараты часто используются для лечения внегоспитальной пневмококковой пневмонии и заболеваний верхних дыхательных путей. Пневмококки могут быть устойчивыми только к 14- и 15-членным макролидам, при сохранении чувствительности к 16-членным макролидам и линкозамидам, а могут быть устойчивыми ко всем представителям этих классов.

Определение устойчивости к хинолонам, хлорамфениколу, тетрациклину, котримоксазолу, рифампицину, ванкомицину, позволяет более полно характеризовать фенотип возбудителя. При этом необходимо учитывать, что ранние хинолоны (офлоксацин), которые применяются в отношении пневмококков, резистентных к пенициллину, в последнее время показывают рост устойчивости к этому препарату. Для преодоления устойчивости используют новые фторхинолоны с повышенной антипневмококковой активностью: спарфлоксацин, моксифлоксацин и др.

Примерно от 5 до 15% культур пневмококков в России демонстрируют полирезистентные свойств, т. е. одновременной устойчивостью к 3 и более классам препаратов.

Для обнаружение АГ пневмококка в пробах биологических жидкостей пациента применяют методы латекс-агглютинации и ИХА. Наборы реагентов, основанные на реакции латекс-агглютинации или коагглютинации, предназначены для работы с материалом, полученным из стерильных локусов (кровь, ликвор), при работе с нестерильными локусами эти наборы могут давать ложноположительный результат. Чувствительность и специфичность наборов разных производителей составляет 94–100% и 85–98%, соответственно. Набор реагентов с использованием ИХА позволяет определить наличие указанного АГ у больных пневмонией (в моче) и менингитом (в СМЖ). Этот тест рекомендован как дополнительный метод диагностики пневмоний. При исследовании проб пациентов с высоким уровнем назофарингеального носительства возможны ложноположительные результаты.

Для обнаружения специфических генетических фрагментов пневмококка применяют ПЦР, в качестве мишеней используют специфические фрагменты генов, кодирующих факторы патогенности: пневмолизин (Ply), аутолизин (LytA), пневмококковый поверхностный АГ (PsaA), пневмококковый поверхностный протеин А (PspA), марганец-зависимая супероксид-дисмутаза (sodA), поверхностный пенициллин-связывающий белок 2b (Pbp2b), Spn9802, Spn9828. Для повышения специфичности исследования применяется мультиплексная ПЦР, при которой проводится одновременная индикация нескольких генов патогенности с сохранением высокой чувствительности реакции.

Остается проблемой установление диагностически значимых количественных показателей, позволяющих дифференцировать заболевание от носительства при исследовании материала из нестерильных локусов.

Метод исследования продуктов АНК при мультилокусном секвенировании-типировании для генетического типирования пневмококков основан на секвенировании внутренних фрагментов семи генов «домашнего хозяйства» (housekeeping genes), специфичных для возбудителя. Метод чаще используется для генетического типирования пневмококка, чем для идентификации.

Использование метода секвенирования участка 16S рибосомальной РНК для идентификации пневмококков затруднено сходством с некоторыми видами стрептококков, входящих в группу Mitis. Гомология ДНК-ДНК между стрептококками, входящими в группу Mitis, составляет 40–60%, тогда как сходство сиквенсов 16S рРНК генов между S.mitis, S.oralis и S.pneumoniae может достигать более чем 99%. Сравнение участков 16S рРНК между штаммами S.pseudopneumoniae и S.pneumoniae (суммарный размер 1 468 пар нуклеотидов) показало 99,7% совпадение сиквенса, различие отмечено только в 5 парах нуклеотидов.

Для исследования используют также методы РНК-ДНК и ДНК-ДНК гибридизации, в основе которых лежит способность нуклеиновых кислот к гибридизации (TaqMan принцип). Готовый набор реагентов для идентификации «AccuProbe Streptococcus pneumoniae culture identification test» (Gen-Probe, USA) построен на этом принципе с использованием в качестве мишени участка гена 16S рРНК. Для детекции участков рибосомальной РНК исследуемого штамма употребляется одноцепочечная ДНК в качестве зонда, которая комплиментарна выбранной специфичной для пневмококка мишени 16S рРНК и содержит хемолюминесцентную метку. При совпадении нуклеотидов мишени рРНК с нуклеотидами ДНК-зонда образуется устойчивое образование в форме ДНК-РНК гибрида. После добавления селектирующего реагента, дифференцирующего гибридизированные и негиброидизированные пробы, меченые гибриды ДНК-РНК могут быть выявлены с помощью люминометра. Если использовать AccuProbe в качестве референтного стандарта, чувствительность и специфичность бактериологических методов идентификации составляет: для желчного теста 98,8% и 82,6%, для реакции набухания капсулы с Omni сывороткой 99,2 и 74,4%; 87,9 и 59,3% для теста с оптохином.

Обнаружение АТ редко используются при проведении лабораторной диагностики пневмококковой инфекции. Это связано с отсутствием надежных доступных методик, имеющих достаточную чувствительность и специфичность и ролью временного фактора, поскольку для выявления роста титров АТ необходимо значительное время от начала заболевания. В настоящий момент используются определения АТ против четырех АГ пневмококка (С-антигена, капсульных полисахаридов, фосфорилхолина и пневмолизина). Чувствительность метода для С-антигена и капсульных полисахаридов составляет 89% и 97% соответственно. Наиболее распространенные методы определения – ИФА и РИФ (МФА). При применении МФА в качестве АГ рекомендуется использовать аутоштамм пневмококка, выделенный от данного больного. В случае отсутствия аутоштамма применяют смесь штаммов из наиболее часто встречающихся на данной территории серотипов. Выявление минимального диагностического титра АТ к пневмококку у детей до 3 лет 1:320 и 1:640 у взрослых свидетельствует о пневмококковой этиологии перенесенного заболевания.

Для определения чувствительности к антибиотикам используются несколько методов.

Диагностика

Если подозревается или рассматривается пневмококковая инфекция, врачам по возможности нужно будет сделать окраску по Граму и культуру соответствующих образцов. Потенциальные образцы могут включать 1 или более из следующих:

  • кровь;
  • спинномозговая жидкость;
  • мокрота;
  • плевральная жидкость или аспират легкого;
  • суставная жидкость;
  • другие образцы абсцесса или ткани.
Читайте также:  Челюстно-лицевой артроз

Все изоляты S pneumoniae, независимо от места выделения, будут проверены на чувствительность к пенициллину и цефотаксиму или цефтриаксону.

Неспецифические лабораторные исследования, которые могут подтвердить диагноз, включают следующее:

  • полный анализ крови и дифференциал;
  • скорость оседания эритроцитов (СОЭ);
  • С-реактивный белок (СРБ).

Визуальные обследования, которые могут быть полезны, включают следующее:

  • рентгенография грудной клетки;
  • УЗИ грудной клетки;
  • компьютерная томография (КТ) грудной клетки, пазух, лица или пораженных костей или суставов;
  • магнитно-резонансная томография (МРТ) головного мозга (при менингите) или пораженных костей и суставов.

Другие методы, которые могут помочь определить степень заражения, включают следующее:

  • эхокардиография;
  • аспирация жидкая среднего уха;
  • аспирация плевральной жидкости;
  • торакостомия грудной клетки или установка катетера;
  • видео-ассистированная торакоскопия или плевральная декортикация;
  • поясничная пункция;
  • пункция полости сустава;
  • биопсия кости, мягких тканей или мышц.

биопсия кости, мягких тканей или мышц.

Специфическая вакцинопрофилактика пневмококковой инфекции

Вакцинация признана наиболее эффективным методом предупреждения ПИ. Согласно позиции ВОЗ, вакцинация – единственный способ существенно повлиять на заболеваемость и смертность от ПИ и снижение уровня резистентности к АБП. Имея подтверждение безопасности и эффективности пневмококковых вакцин, специалисты ВОЗ и UNICEF считают необходимым включать пневмококковые вакцины с подтвержденным профилем безопасности и эффективности во все национальные программы иммунизации.

При проведении ВП ПИ необходимо руководствоваться действующими нормативными и методическими документами по организации иммунизации, прежде всего – Национальным календарем профилактических прививок и Календарем профилактических прививок по эпидемическим показаниям, а также инструкциями по применению иммунобиологических препаратов.

В Российской Федерации вакцинация против ПИ всех взрослых лиц, достигших возраста 50 лет, и пациентов групп риска (в т. ч. ВИЧ-инфицированных) в настоящее время включается в качестве обязательного мероприятия в клинические рекомендации и стандарты оказания медицинской помощи по терапии, кардиологии, неврологии, онкологии, онкогематологии, нефрологии, пульмонологии, аллергологии, иммунологии, эндокринологии и трансплантологии.

Вакцинация против ПИ направлена на предупреждение возникновения генерализованных форм пневмококковой инфекции (иПИ), пневмоний, снижение заболеваемости, инвалидизации и смертности населения от этих инфекций. Согласно данным ВОЗ по разным странам, убедительно показано, что специфическая ВП является наиболее доступным и экономичным способом профилактики ПИ. Это подтверждается также результатами отечественных исследований..

с врожденными и приобретенными иммунодефицитами в т.

Пневмококк, определение ДНК в мокроте (Streptococcus pneumoniae, DNA)

  • Программа обследования для офисных сотрудников
  • Обследование домашнего персонала
  • Оценка риска развития заболеваний сердечно-сосудистой системы
  • Диагностика антифосфолипидного синдрома (АФС)
  • Оценка функции печени
  • Диагностика состояния почек и мочеполовой системы
  • Диагностика состояния желудочно-кишечного тракта
  • Диагностика заболеваний соединительной ткани
  • Диагностика сахарного диабета
  • Диагностика анемий
  • Онкология
  • Диагностика и контроль терапии остеопороза
  • Биохимия крови
  • Диагностика состояния щитовидной железы
  • Госпитальные профили
  • Здоров ты – здорова страна
  • Гинекология, репродукция
  • Здоровый ребёнок: для детей от 0 до 14 лет
  • Инфекции, передаваемые половым путём (ИППП)
  • Проблемы веса
  • VIP-обследования
  • Болезни органов дыхания
  • Аллергия
  • Определение запасов микроэлементов в организме
  • Красота
  • Витамины
  • Диеты
  • Лабораторные исследования перед диетой
  • Спортивные профили
  • Глюкоза и метаболиты углеводного обмена
  • Белки и аминокислоты
  • Желчные пигменты и кислоты
  • Липиды
  • Ферменты
  • Маркеры функции почек
  • Неорганические вещества/электролиты:
  • Витамины
  • Белки, участвующие в обмене железа
  • Кардиоспецифичные белки
  • Маркёры воспаления
  • Маркёры метаболизма костной ткани и остеопороза
  • Определение лекарственных препаратов и психоактивных веществ
  • Биогенные амины
  • Метаболический синдром
  • Специфические белки
  • Комплексные иммунологические исследования
  • Лимфоциты, субпопуляции
  • Оценка фагоцитоза
  • Иммуноглобулины
  • Компоненты комплемента
  • Регуляторы и медиаторы иммунитета
  • Интерфероновый статус, оценка чувствительности к иммунотерапевтическим препаратам:
  • Системные заболевания соединительной ткани
  • Ревматоидный артрит, поражения суставов
  • Антифосфолипидный синдром
  • Васкулиты и поражения почек
  • Аутоиммунные поражения желудочно-кишечного тракта. Целиакия
  • Аутоиммунные поражения печени
  • Неврологические аутоиммунные заболевания
  • Аутоиммунные эндокринопатии
  • Аутоиммунные заболевания кожи
  • Заболевания легких и сердца
  • Иммунная тромбоцитопения
  • Клинический анализ мочи
  • Биохимический анализ мочи
  • Светооптическое исследование сперматозоидов
  • Электронно-микроскопическое исследование спермы
  • Антиспермальные антитела
  • Генетические VIP-профили
  • Образ жизни и генетические факторы
  • Репродуктивное здоровье
  • Иммуногенетика
  • Резус-фактор
  • Система свертывания крови
  • Болезни сердца и сосудов
  • Болезни желудочно-кишечного тракта
  • Болезни центральной нервной системы
  • Онкологические заболевания
  • Нарушения обмена веществ
  • Описание результатов генетических исследований врачом-генетиком
  • Фармакогенетика
  • Система детоксикации ксенобиотиков и канцерогенов
  • Определение пола плода
  • Резус-фактор плода
  • Обследование новорождённых для выявления наследственных болезней обмена веществ
  • Дополнительные исследования (после проведения скрининга и консультации специалиста)
  • Исследование качества воды
  • Исследование качества почвы
  • Общая оценка естественной микрофлоры организма
  • Исследование микробиоценоза урогенитального тракта (ИНБИОФЛОР)
  • Фемофлор: профили исследований дисбиотических состояний урогенитального тракта у женщин
  • Специфическая оценка естественной микрофлоры организма
  • Кровь
  • Моча
  • Кал
  • Спермограмма
  • Гастропанель
  • УЗИ

Пневмококк Streptococcus pneumoniae относится к роду стрептококков. S. pneumoniae вызывает различные по локализации и степени тяжести инфекции у человека. Пневмококк может быть причиной пневмоний, бронхитов, фарингитов, тонзиллитов, риносинуситов. Может вызвать обострение хронического бронхита и хронической обструктивной болезни легких. S. pneumoniae способен проникать в кровяное русло и вызывать гематогенные стрептококковые поражения (сепсис, менингит, артрит, молниеносная пурпура, аортит, эндокардит, фасциит, миозит и др).

Наиболее подвержены заражению пневмококком дети, пожилые люди и пациенты с различными иммунодефицитными состояниями. Мужчины заболевают пневмококковыми инфекциями в 2 раза чаще, чем женщины. Стрептококковые менингиты регистрируют во всех возрастных группах. Чаще всего клинические формы инфекции развиваются при нарушениях резистентности организма (например, после переохлаждения).

Основной путь передачи инфекции – воздушно-капельный. Отмечены случаи внутриутробного заражения плода от инфицированной матери. Пик заболеваемости, которая носит спорадический характер, приходится на осенне-зимний период.

Система детоксикации ксенобиотиков и канцерогенов.

Диагностика пневмококковой инфекции

и проявляющиеся разнообразными симптомами с возможным развитием менингита, пневмонии, сепсиса. Это заболевание является одной из главных причин смертности детей.

Инфекцию вызывает бактерия под названием пневмококк, в растоящее время известно более 80 ее типов. Она является представителем нормальной микрофлоры верхних дыхательных путей. В норме встречается носительство одного или нескольких типов пневмококков, показатель которого колеблется от 5-10 до 60-65%. Особенностью бактерии является ее капсула. Она препятствует развитию защиты к болезни у детей до 2-х летнего возраста. Поэтому маленькие дети могут болеть пневмококковой инфекцией

Как передается пневмококковая инфекция?

Источником инфекции являются: больные клинически выраженной формой болезни, носители пневмококков.

Основной механизм заражения – аэрогенный, а путь – воздушно-капельный. Инфицирование происходит при чихании, кашле, разговоре с источником инфекции. Наиболее подвержены заражению лица, находящиеся в непосредственном контакте с источником инфекции (при чихании и кашле – это аэрозольное облако 3 метра в диаметре).

Группы риска заражения:

1) Дети до 2х лет, иммунные клетки которых не способны бороться с возбудителем. Дети первого полугодия жизни имеют материнские антитела, количество которых спустя 6 мес. жизни сильно снижается, в связи с чем увеличивается риск развития инфекции.

2) Дети и взрослые с иммунодефицитом (хронические заболевания органов дыхания, сердечнососудистой системы, сахарный диабет, почечная недостаточность, цирроз печени; ВИЧ-инфекция, онкологические болезни, заболевания крови).

3) Возрастной иммунодефицит (лица преклонного возраста старше 65 лет).

4) Лица с табачной и алкогольной зависимостью. Чаще всего пневмококковой инфекцией болеют дети до 5 лет и пожилые люди старше 65 лет.

Время с момента заражения до развития болезни обычно составляет от 1 до 3 дней.

1) Пневмококковая пневмония (воспаление легких);

2) Пневмококковый менингит (воспаление мягкой мозговой оболочки);

3) Пневмококковый отит (воспаление среднего уха);

4) Пневмококковый сепсис (заражение крови).

Пневмококковая пневмония

Пневмония характеризуется высокой температурой – подъемом до высоких цифр – 38-39°, ознобом, выраженной слабостью, мышечными болями, одышкой, учащенным сердцебиением; вскоре появляется влажный кашель с мокротой слизисто-гнойного характера (по цвету желтовато-зеленоватая), порой при кашле беспокоят боли в грудной клетке.

Пневмония при пневмококковой инфекции могжет быть крупозной (внезапное начало, высокая температура, выраженные ознобы, румянец на щеках, резкие боли в грудной клетке и мокрота с коричневым оттенком – «ржавая», при выслушивании влажные хрипы, крепитация, «шум трения плевры», притупление перкуторного звука) или очаговой (возникает на фоне проявлений острой респираторной инфекции – появляется слабость, влажный кашель, потливость, одышка, мокрота слизисто-гнойная, боли в небольшом участке грудной клетки, бледность кожных покровов, выслушиваются мелко и среднепузырчатые хрипы). Крупозная пневмония протекает тяжелее, возможно развитие острой дыхательной недостаточности, формирование абсцессов, плеврита. Очаговая пневмония легче по тяжести, однако инфильтрация рассасывается в более длительный срок – до 4х недель.

Когда нужно обратиться к врачу: появление высокой температуры при выраженной слабости, кашель с мокротой гнойного и «ржавого» характера, боли в грудной клетке.

Пневмококковый менингит

Пневмококковый менингит начинается остро с повышения температуры тела до 40°, появляется диффузная головная боль распирающего характера. У большинства больных несколько позже присоединяются многократная рвота, повышенная чувствительность ко всем видам раздражителей. Появляются и быстро нарастают менингеальные симптомы: ригидность мышц затылка, симптом Кернига, Брудзинского и др. Для больных характерна «менингеальная поза» или «поза легавой собаки». Сознание сначала сохранено, а затем сменяется состоянием оглушенности, стопора, комы.

Когда нужно обратиться к врачу: высокая температура, сильная головная боль, многократная рвота, боли в шее, невозможность ее согнуть – все эти симптомы для незамедлительного обращения к доктору. У детей раннего возраста – высокая температура, постоянный плач и беспокойство ребенка – повод для срочного обращения к врачу. Менингит требует срочного лечебного вмешательства!

Пневмококковый отит

Пневмококковый отит характеризуется температурой, болью в области уха, гиперакузией (повышением чувствительности к слуховым раздражителям). По данным исследований, проведенных в США, именно острый средний отит является самой частой причиной снижения слуха у детей.

Пневмококковый сепсис проявляется инфекционно-токсическим синдромом (температура, слабость, головные боли), увеличением селезенки (что больной часто не чувствует), симптомы поражения различных органов и систем (легких, сердца, кишечника, почек, мозговых оболочек).

Можно ли самостоятельно принимать антибиотики при пневмококковой инфекции? Нежелательно, поскольку правильно определить необходимую группу антибактериальных препаратов под силу только доктору. Неправильный подбор препарата и дозу может привести не только к отсутствию эффекта лечения, но и существенному снижению иммунитета, а, следовательно, и ухудшению общего состояния больного.

Профилактика пневмококковой инфекции:

1) вакцинация детей раннего возраста. В России зарегистрировано три вакцины против пневмококковой инфекции: Превенар (PCV7, PCV13) , Пневмо 23 (PPSV23), Синфлорикс 10. Превенар-13 используется для вакцинации детей с 2х месяцев до 5 лет, а Пневмо-23 с 2х лет и старше. Вакцины не содержат возбудителей, а содержат очищенные полисахариды наиболее часто встречаемых типов пневмококков. Вводятся вакцины по разным схемам в зависимости от возраста. Иммунитет вырабатывается через 10-15 дней после введения и сохраняется в течение 5 лет.

2) неспецифическая: изоляция больных, поддержание иммунитета, витаминопрофилактика, своевременное лечение ОРЗ, занятия спортом, закаливание.

Она препятствует развитию защиты к болезни у детей до 2-х летнего возраста.

Диагностика пневмококковой инфекции

Вид материала и ход бактериологического исследования на пневмококк зависят от формы заболевания.

При пневмонии и поражениях бронхиального дерева основным материалом является мокрота (утренняя порция); кроме того, исследуют смывы с бронхов, получаемые при бронхоскопии, гной из абсцесса легкого или плевральную жидкость, которые берут путем пункции.

Читайте также:  Избавляемся от отеков при беременности

При культуральном исследовании мокроты необходимо учитывать два обстоятельства.

Во-первых, мокрота негомогенна, состоит из слизистых комочков, и микроорганизмы распределены в ней неравномерно. Поэтому необходима предварительная гомогенизация мокроты — растирание в ступке с песком (в стерильных условиях) или обработка муколитиками — веществами, растворяющими слизь (например, 0,5% ацетилцистеином, хемотрипсином), либо в гомогенизаторе.

Во-вторых, порции мокроты из нижних отделов респираторного тракта при прохождении через верхние отделы обязательно инфицируются микроорганизмами ротоглотки, среди которых могут быть и носительские пневмококки. Однако количество последних в пробах невелико, а агент воспаления легких или бронхов присутствует в мокроте в больших количествах. Поэтому гомогенизированную мокроту разводят серийно, с шагом 10, в 10 6 -10 7 раз, после чего делают посевы из раз-ведений по 0,1 мл. Только при наличии роста в разведении мокроты в 10 6 и выше (а бронхиальных смывов — в 10 4 ) выделенный микроорганизм считается возбудителем заболевания.

При воспалении среднего уха отделяемое берут ватным тампоном, укрепленным на проволочном стержне.

При подозрении на менингит исследуют спинномозговую жидкость (СМЖ), взятую при помощи люмбальной пункции со строгим соблюдением правил асептики.

Жидкость при плевритах, асцитах, артритах также берут путем пунктирования в асептических условиях.

Гной при фронтитах, синуситах, отитах можно взять стерильным ватным тампоном во время хирургической операции или при спонтанном истечении.

Кровь у лихорадящих больных при подозрении на пневмококковую бактериемию берут стерильно из вены и без предварительной микроскопии засевают в специальные жидкие или двухфазные среды для гемокультур. Посевы инкубируют в термостате и делают из них высевы для получения чистых культур.

Первый день исследования. После взятия и обработки материала (мокрота, СМЖ, гной, плевральная и другие жидкости) из него готовят препараты-мазки, окрашенные по Граму; если при микроскопии видны грамположительные инкапсулированные диплококки ланцетовидной формы, то можно выдать предварительный ответ. Независимо от результатов бактериоскопии проводится полное бактериологическое исследование, цель которого — выделение чистой культуры и ее идентификация.

Основной средой для выделения чистой культуры пневмококка является питательный агар с добавлением 5-10% крови барана, лошади, кролика, который помещают в чашки Петри. Для подавления посторонней микрофлоры при исследовании материала из открытых полостей (легких, бронхов, пазух носа, среднего уха) на поверхность среды накладывают диск с антибиотиком мономицином или гентамицином, к которым пневмококк практически нечувствителен. Вокруг диска рост нормальной флоры подавляется.

Плевральную и другие жидкости из серозных полостей, а также инкубированную в жидкой среде кровь, высевают на 5%-ный кровяной агар.

При посеве СМЖ больного с подозрением на гнойный менингит, учитывая возможное присутствие в ней пневмококка, Haemophilus influenzae или менингококка, производят одновременный посев на «шоколадно»-кровяной агар и 20%-ный сывороточный агар. Засеянные чашки инкубируют в атмосфере с 5-10% CO2 (в «свечном» сосуде).

Второй день исследования. Через 24 ч инкубации посевы просматривают; подозрительные на пневмококк колонии отсевают в пробирки со скошенным сывороточным или кровяным агаром для окончательной идентификации. Так как колонии пневмококка на кровяном агаре очень сходны с колониями других видов стрептококков, окруженными зоной позеленения среды (α-гемолиз), — «зеленящих» оральных стрептококков, энтерококков, — то полученные из колоний чистые культуры дифференцируют с этими микроорганизмами.

Наиболее надежными признаками для дифференциации пневмококка и сходных с ним бактерий является его чувствительность к оптохину и желчи. Подлежащую дифференциации культуру засевают на кровяной агар с 0,00025% оптохина и на бульон с 10% желчи и для контроля — на эти же среды без оптохина и желчи. Возможно использование коммерческих дисков, пропитанных оптохином, а также самостоятельно приготовленных дисков, пропитанных раствором 20% желчи. В последнем случае диск накладывается на рост 22-24-часовой культуры на кровяном агаре; лизис наступает через 3 ч.

Одновременное применение обоих тестов обязательно, так как на слизистых оболочках встречается похожий на пневмококк S.pseudopneumoniae. Этот микроорганизм чувствителен к оптохину в обычных условиях, но устойчив к желчи. При сомнительных результатах желчного теста надо поставить оптохиновый тест, инкубируя чашки в присутствии CO2 («свечной сосуд»), В этих условиях S. pseudopneumoniae оказывается нечувствительным и к оптохину.

В качестве дополнительных признаков, позволяющих отличить пневмококк от сходных с ним (по морфологии клеток и колоний, а также α-гемолизу) энтерококков, можно применить следующие тесты: рост при температуре +10°С и +45°С; рост после прогревания бульонной культуры при 60°С в течение 30 мин; рост в бульоне с 6,5% хлорида натрия. Все эти пробы отрицательны у пневмококка, но положительны для энтерококка.

Третий день исследования. Готовят и микроскопируют окрашенные по Граму мазки из выросших культур. Морфологически пневмококк выглядит в культуре иначе, чем в мазках нативного материала (мокрота, СМЖ и т.д.). Клетки теряют ланцетовидную форму и образуют небольшие скопления или цепочки, состоящие из пар; капсула незаметна.

Учитывают результаты определения чувствительности выделенных культур к оптохину и желчи, а также данные других проб (если эти пробы были поставлены).

Возможна выдача окончательного ответа (о наличии или отсутствии в материале пневмококка). У выделенной культуры пневмококка определяют ее принадлежность к определенному серотипу (серогруппе), ряд признаков патогенности, а также чувствительность к антибиотикам.

Для серотипирования используют иммунные кроличьи сыворотки к наиболее распространенным типам (или хотя бы серогруппам). Реакция агглютинации не всегда пригодна из-за склонности пневмококка к спонтанному склеиванию. В таких случаях применяют реакцию набухания капсул на стекле по Neufeld, учитываемую при микроскопии смеси живой культуры с иммунной сывороткой.

В этой реакции специфические антитела, адсорбирующиеся на клеточной капсуле, создают оптический эффект утолщения капсулы по сравнению с клетками, взвешенными в изотоническом растворе хлорида натрия (контроль). Чтобы прозрачные капсулы были лучше заметны, в смесь бактерий и сыворотки, а также в контрольную взвесь вносят каплю 1% раствора метиленового синего. Видовую принадлежность культуры к S.pneumoniae можно подтвердить при помощи так называемой Омни-сыворотки, полученной путем иммунизации кроликов культурами всех типов пневмококка, в реакции набухания капсул или в агглютинации.

Хорошие результаты серогруппирования получены с использованием реакции коагглютинации с коммерческим реагентом или приготовленным самостоятельно из взвеси формалинизированного стафилококка и иммунных сывороток.

Для выявления вирулентности выделенного штамма ставят пробы на пневмолизин, гиалуронидазу, определяют летальные дозы для мышей.

Пневмолизин можно определить качественным методом путем посева культуры в чашку на питательный агар с 2% лошадиной крови и 10% нормальной сыворотки с последующей инкубацией в анаэростате. Через 22—24 ч вокруг колоний образуется зона β-гемолиза. Более рационален количественный метод. Используют 24-часовую культуру пневмококка на бульоне с 0,001%-ным раствором лецитина. Такая культура содержит уже аутолизированные клетки. Делают ряд двукратных серийных разведений культуры (в пробирках или в лунках микротитратора) и в каждое добавляют равный объем 0,5%-ной взвеси эритроцитов (человека, барана). Смесь инкубируют 1 ч в термостате, а затем сутки — в холодильнике. Наивысшее разведение, при котором наблюдается лизис эритроцитов, принимают за титр пневмолизина. Этот метод позволяет сравнивать пневмолитическую активность различных штаммов.

Гиалуронидазу определяют по методу Мак-Клина-Смирновой с использованием в качестве субстрата гомогената пупочных канатиков.

Вирулентность для белых мышей (14-16 г) устанавливают путем внутрибрюшинного введения разведений суточной агаровой культуры. Высоковирулентными считаются штаммы, ЛД50 которых не превышает 10 3 КОЕ, низковирулентными — штаммы, ЛД50 которых свыше 10 6 КОЕ.

Экспресс-методы микробиологической диагностики пневмококковой инфекции. В инфицированных пневмококком жидкостях организма, в частности, в моче, находятся растворенные специфические капсульные антигены. Для их выявления применяют реакции латекс-агглютинации или коагглютинации на стекле, иммуноферментный анализ, реакцию иммунофлюоресценции. В качестве источника антител в этих реакциях используется или Омни-сыворотка, содержащая антитела ко всем серотипам пневмококка, или сыворотка к видовому поверхностному антигену.

Серологическая диагностика. К концу первой недели острой пневмококковой инфекции (пневмонии, менингита, отита и т.д.) специфические антитела к капсульным полисахаридам появляются в слюне (IgA), а к 7-10-му дню — уже в крови (IgG). Антитела удается выявить в реакции непрямой иммунофлюоресценции с использованием серотиповых штаммов (или аутоштамма), иммуноферментного анализа с применением типовых капсульных полисахаридов. Серологические реакции с использованием видовых пневмококковых антигенов не разработаны.

При интерпретации результатов серологических реакций следует помнить, что в крови детей в возрасте до 6 мес. содержатся материнские антитела (IgG), и с этого срока до 2 лет дети слабо реагируют на капсульные антигены. Кроме того, у более старших детей и взрослых могут содержаться антитела к пневмококку как следствие предшествующих встреч с этим микроорганизмом. Указанные обстоятельства снижают ценность серодиагностики пневмококковой инфекции. В пользу этиологического значения пневмококка при острой пневмонии может говорить нарастание специфических антител в 4 раза и более.

Хранение и транспортировка выделенных культур пневмококка. Хранение культур S. pneumoniae затруднено из-за его склонности к аутолизу. Для хранения рекомендуют засевать культуру в пробирку со скошенным кровяным агаром, но не инкубировать в термостате, а хранить при 4-7°С в холодильнике. В таком состоянии возможна и транспортировка культур. Для регенерации культуры засеянную среду инкубируют при 37°С в течение 1 сут.

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 21.11.2019

Для хранения рекомендуют засевать культуру в пробирку со скошенным кровяным агаром, но не инкубировать в термостате, а хранить при 4-7 С в холодильнике.

Пневмококковая пневмония

Пневмококковая инфекция может спровоцировать пневмонию. При этом могут наблюдаться такие симптомы:

  • озноб, одышка, поверхностное дыхание;
  • температура – до 40 градусов;
  • мышечная слабость;
  • аритмия или тахикардия;
  • боли в грудной области при кашле;
  • кашель с гнойно-слизистыми выделениями.

Если болезнь спровоцирована пневмококковой инфекцией, то различают очаговую и крупозную пневмонию. Крупозная форма недуга протекает гораздо тяжелее. Есть существенный риск развития осложнений:

  • лёгочная недостаточность;
  • плеврит;
  • развитие абсцесса.

Очаговая форма, при своевременно начатом лечении, не вызывает существенных осложнений. Но период инфильтрации длиться несколько дольше — до 4-х недель.

Если начать лечение своевременно, то существенных осложнений можно избежать.

Возможные осложнения

При несвоевременном или неправильном лечении возможны такие осложнения:

  • отёчность и другие нарушения головного мозга;
  • заражение крови;
  • остановка сердца;
  • нарушение функциональности внутренних органов, вплоть до летального исхода.

После обращения в клинику врач внимательно осмотрит пациента и назначит соответствующие способы диагностики.

Пневмококковый менингит

Острый гнойный менингит часто вызывается пневмококками и может быть вторичным, вследствие распространения (вторичная бактериемия) из других очагов инфекции (особенно при пневмонии); непосредственного распространения инфекции из уха, сосцевидного отростка, околоносовых пазух; при переломе основания черепа, включающем одно из этих мест или пластинку решетчатой кости (как правило, с истечением ликвора), что способствует проникновению бактерий из околоносовых пазух, носоглотки и среднего уха в ЦНС.

Наблюдаются типичные симптомы менингита (например, головная боль, ригидность затылочных мышц, лихорадка).

Осложнения после пневмококковых менингитов включают

Потерю слуха (у 50% пациентов)

Параличи или парезы

Перфорация барабанной перепонки.

Профилактика

Пневмококковая инфекция очень заразная, поэтому во избежание эпидемий против нее ставят прививку. Ее разрешено делать детям с 2-месячного возраста. Ревакцинацию проводят дважды с интервалом в 1 месяц и еще один раз после исполнения ребенку 1,5 лет. До 2 лет используют вакцину Превенар, а затем – полисахаридный препарат Пневмо-23. Это специфическая профилактика пневмококковой инфекции. К неспецифической относятся следующие мероприятия:

  • соблюдение здорового образа жизни;
  • контроль состояния иммунитета;
  • своевременное лечение воспалительные и инфекционных заболеваний;
  • соблюдение правил личной гигиены;
  • уменьшение количества посещений мест с большим скоплением людей во время эпидемий простудных заболеваний;
  • правильный рацион питания, обогащенный витаминами и минералами;
  • промывание носа солевым раствором в период эпидемий ОРЗ и гриппа;
  • исключение переохлаждений организма.

Ревакцинацию проводят дважды с интервалом в 1 месяц и еще один раз после исполнения ребенку 1,5 лет.

Добавить комментарий