Сифилис РПГА (реакция пассивной гемагглютинации), титр

Общая информация об исследовании

Сифилис – инфекция, передающаяся половым путем, возбудителем которой является спирохета Treponema pallidum subspecies pallidum. Попадание этой бактерии в организм приводит к развитию иммунного ответа, сопровождающегося выработкой как неспецифических (“нетрепонемных”), так и специфических (“трепонемных”) антител. Выявление антител к T. pallidumсоставляет основу лабораторного подтверждения сифилиса. В зависимости от типа антител, определяемых в реакции, серологические исследования разделяют на неспецифические (“нетрепонемные”) и специфические (“трепонемные”). Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА) относится к “трепонемным”, то есть специфическим в отношении T. pallidum тестам.

РПГА основана на феномене агглютинации эритроцитов, на поверхности которых адсорбированы антигены T. pallidum (реагент РПГА), при добавлении к ним сыворотки больного сифилисом, содержащей специфические антитела к спирохете. Такие антитела появляются в крови пациентов с сифилисом через 2 (IgM) и 4 (IgG) недели после инфицирования. Следует отметить, что этот период может удлиняться до 6 недель. Поэтому чувствительность РПГА в первичном периоде сифилиса несколько уступает чувствительности этого метода во вторичном и третичном периодах и составляет около 86 %. Преимуществом РПГА является высокая специфичность (96-100 %), позволяющая использовать этот анализ в качестве подтверждающего теста после положительного результата какого-либо неспецифического, “нетрепонемного” исследования (например, антикардиолипинового теста, RPR). Чувствительность РПГА во вторичном, третичном периоде сифилиса, а также при скрытом сифилисе составляет 99-100 %.

Чувствительность РПГА и других “трепонемных” тестов превосходит чувствительность неспецифических (“нетрепонемных”) тестов, таких как микрореакция преципитации (МРП) с кардиолипиновым антигеном. Поэтому в последнее время в качестве скринингового теста на сифилис стали чаще применять “трепонемные” тесты, в том числе РПГА. При положительном результате скринингового исследования на сифилис с помощью РПГА следует провести подтверждающий тест. В этом случае им является любой другой “трепонемный” тест, но не РПГА (например, иммуноферментный анализ).

Как правило, результат РПГА остается положительным даже после лечения сифилиса. Исключение составляет ситуация, когда терапия была проведена в самом начале заболевания. Так как результат сохраняется положительным пожизненно, РПГА не предназначена для дифференциальной диагностики раннего и позднего сифилиса. По этой же причине данное исследование не используют, чтобы оценивать эффективность лечения заболевания.

При добавлении сыворотки больных сифилисом к реагенту РПГА происходит агглютинация (склеивание) и выпадение в осадок эритроцитов. Степень агглютинации зависит от концентрации антител в сыворотке, поэтому РПГА позволяет не только выявить присутствие антител, но и определить их количество. Результат анализа представлен в виде титра антител. Любой положительный титр указывает на возможную инфекцию T. pallidum, однако возможны ложноположительные реакции. Значительно повышенные показатели характерны для вторичного и скрытого раннего сифилиса.

Ложноположительные результаты РПГА наблюдаются в 0,05-2,5 % случаев и чаще всего обусловлены наличием в сыворотке пациента аутоантител (при системных заболеваниях соединительной ткани, например при системной красной волчанке), антител к другим возбудителям, схожим по антигенной структуре с T. pallidum (Borrelia burgdorferi, сапрофитные трепонемы полости рта и гениталий), а также другими физиологическими и патологическими состояниями (беременность, онкологические заболевания, острый инфаркт миокарда). Как правило, титр ложноположительной реакции РПГА низкий. Исключение составляют результаты РПГА у пациентов с диффузными заболеваниями соединительной ткани и злокачественными новообразованиями, когда титр антител может достигать очень высоких значений. Ложноположительные реакции негативируются спонтанно и бесследно в течение 4-6 месяцев (острая ложноположительныя реакция, часто на фоне беременности) или более длительного периода (хроническая ложноположительная реакция).

Учитывая эти особенности, результат РПГА следует интерпретировать с учетом дополнительных анамнестических и лабораторных данных. При подтверждении диагноза “сифилис” необходимо исключить наличие других инфекций, передающихся половым путем, а также обследовать всех половых партнеров и членов семьи пациента.

Для чего используется исследование?

Чтобы подтвердить диагноз “сифилис” при положительном результате неспецифического скринингового теста;
для скрининга сифилиса;
для обследования лиц, находившихся в половом и тесном бытовом контакте с больным сифилисом;
для исключения сифилиса у донора крови.

Когда назначается исследование?

пациента с клиническими признаками сифилиса (безболезненный эрозивный или язвенный дефект на твердом основании) и регионарной лимфаденопатии (первичный сифилис), полиморфная кожная сыпь, многоочаговая или диффузная алопеция, сифилитическая лейкодерма (вторичный сифилис), плотноэластический узел с распадом или формированием “сухого” рубца (третичный сифилис);
лиц, находившихся в половом и тесном бытовом контакте с больным сифилисом;
донора крови;
при ежегодном профилактическом обследовании, госпитализации в стационар, оформлении санитарной книжки.

Ложноположительные реакции негативируются спонтанно и бесследно в течение 4-6 месяцев острая ложноположительныя реакция, часто на фоне беременности или более длительного периода хроническая ложноположительная реакция.

РПГА качественный

Любой анализ, отвечающий на вопрос: есть или нет в организме возбудитель болезни, называют качественным. Часто этого достаточно для того, чтобы диагностировать недуг и приступить к лечению.

Однако следует учитывать и тот факт, что антитела к возбудителю недуга остаются в организме навсегда. И если человек заболел сифилисом, прошел курс лечения и выздоровел, даже спустя десятилетия в его крови будут обнаружены антитела. Как же в таком случае узнать: опять произошло заражение или нет? Ответ на этот вопрос дает полуколичественный анализ РПГА.

И если человек заболел сифилисом, прошел курс лечения и выздоровел, даже спустя десятилетия в его крови будут обнаружены антитела.

Цена вопроса

Стоимость исследования крови с применением реакции пассивной гемагглютинации составляет в среднем 5,6$. При этом в частных лабораторных центрах за взятия венозной крови для проведения анализа берется 2,8$. В государственных клиниках исследование проводится бесплатно по направлению врача-венеролога.

Срок исполнения в этом центре 1 рабочий день.

Особенности проведения

Перед выполнением процедуры испытания, необходимо подержать образец, разбавитель, контрольные и испытательные ячейки при комнатной температуре (25-30 ° C). Для каждого качественного теста требуется тестовая карта с тремя лунками. Положительный и отрицательный контроль следует проводить вместе с тестируемой сывороткой. При РПГА эритроциты, поверхность которых адсорбировала антигены бледной трепонемы, склеиваются друг с другом, то есть происходит их агглютинация.

A: Разведение образца сыворотки:

Добавляется 10 мкл сыворотки пациента в первую лунку А.
Затем присоединяется 190 мкл разбавителя.
Содержимое перемешивается с помощью микропипетки (разведенная сыворотка используется позже).

B: Тестирование образца сыворотки на наличие специфических антител:

Добавляется 75 мкл контрольных клеток в лунку B и 75 мкл тестовых клеток в лунку C.
Прибавляется 25 мкл разведенной сыворотки в каждую лунку B и C.
Аккуратно встряхивается пластина, чтобы тщательно перемешать содержимое.
Ячейки накрываются для защиты от прямых солнечных лучей, тепла и любых источников вибрации.
Инкубируются 45-60 минут при комнатной температуре.
Затем происходит интерпретация результатов.

Ячейки накрываются для защиты от прямых солнечных лучей, тепла и любых источников вибрации.

Что такое РПГА в анализе крови?

Этот способ исследования (реакция пассивной гемагглютинации, РПГА) имеет и второе название: реакция непрямой гемагглютинации (РНГА). И в практике может встретиться как аббревиатура РПГА, так и РНГА. Что это за анализ? Для него необходима центрифугированная сыворотка крови пациента, которую совмещают с особым диагностическим реагентом. Классически он называется «эритроцитарный антигенный диагностикум». Для его приготовления долгие годы использовались клетки красной крови, или эритроциты. Но так было сравнительно давно, а в настоящее время биологический материал уже не используют, и вместо этого применяют микроскопические частицы латекса.

На эти частицы с помощью особой технологии наносят характерные для данного инфекционного возбудителя антигены, которые являются его «визитной карточкой». В результате получается множество частиц, на поверхности которых находятся адсорбированные, и крепко связанные с носителем активные молекулы антигена.

В том случае, если в сыворотке крови пациента находятся выработанные к данному возбудителю антитела, то эти частицы латекса или эритроциты, склеиваются антителами между собой, и выпадают в осадок, который называется агглютинацией (переводе означает «склеивание»). Эту реакцию ставят в специальных планшетах, которые выполнены из пластика и рассчитаны на небольшие объемы. А раньше анализ крови на РПГА проводилась с набором обычных пробирок. В них в разных разведениях находилась кровь пациента, к которой и добавляли диагностикум.

В некоторых случаях применяется зеркальный метод, когда диагностикум содержит не антигены, а антитела. Этот метод (РОНГА, или обратная гемагглютинация) применяется при поиске инфекции, при которых в крови циркулируют токсины, например при ботулизме. В таком случае, если у пациента в крови есть ботулотоксин, то он связывается со специфическими антитоксическими антителами диагностикумов, и также наблюдается реакция агглютинации, которую можно определить в зависимости от разведения сыворотки крови.

Расшифровка складывается из самого факта агглютинации, и того максимального разведения сыворотки крови, при которой она еще уверенно определяется. Чем больше разведена кровь, при которой еще есть агглютинация, тем больше в организме пациента находится антител, и тем выше специфическая напряженность иммунитета при классическом проведении этой реакции. Наиболее часто используется разведения от 1:20 до 1:160 и выше. В настоящее время непрямую РНГА чаще всего используют для первичной диагностики сифилиса.

Для его приготовления долгие годы использовались клетки красной крови, или эритроциты.

Справка о сифилисе

Сифилис – хроническое инфекционное ЗППП, вызываемое бледной трепонемой. Бледная трепонема – микроорганизм из порядка спирохет, которые представляют собой бактерии в виде спиралей.

Есть несколько путей заражения сифилисом:

Прямой (половой), преобладающий.
Косвенный (бытовой).
Трансплацентарный (от женщины к плоду).

Сифилис принято разделять на несколько этапов:

Инкубационный период.
Первичный сифилис.
Вторичный сифилис.
Третичный сифилис.

Инкубационный период длится около двух недель, при этом нет никаких видимых признаков заражения. Бледная трепонема в этот момент активно осваивается в организме, размножается. Вследствие этого на коже/слизистой, в том месте, через которое попали микроорганизмы, формируется первичный очаг.

Первичный очаг представляет собой узелок, твердый и безболезненный, характерно его покраснение. Такое образование, иначе именуемое твердым шанкром, указывает на начало первичного сифилиса. По прошествии некоторого времени (до 2-3 недель) поражаются ближайшие лимфоузлы.

Внимание! В инкубационном периоде и в начале (2-3 недели) первичного сифилиса бледная трепонема в крови не обнаруживается, так как она еще не успела попасть в системный кровоток. Анализ крови на данном этапе неинформативен.

Во время вторичного сифилиса на коже больного обнаруживаются множественные высыпания. Они могут быть разных форма и размеров, называются сифилидами. В каждом таком сифилиде содержится огромное количество трепонем, потому период считается самым заразным.

В настоящее время редко встречается последняя стадия, так как она развивается лишь через годы от момента заражения. Кроме того, заболевание вполне успешно поддается лечению, если проходить терапию на первых этапах.

Во время третичного сифилиса поражаются внутренние органы и системы, это может приводить к летальному исходу. Для этого периода характерны гуммы – особые отграниченные зоны воспаления, которые имеют хронический характер. Эта стадия практически не несет опасности для окружающих.

Проанализировав все вышесказанное, можно выделить несколько критериев, которые влияют на выраженность и локализацию поражения:

путь проникновения трепонемы в организм;
стадия заболевания;
время начала лечения и сам подход к терапии.

Для этого периода характерны гуммы особые отграниченные зоны воспаления, которые имеют хронический характер.

Сифилис РПГА (реакция пассивной гемагглютинации), титр

Выявление в сыворотке крови специфических антител к бледной трепонеме (Treponemapallidum), используемое для подтверждения результатов неспецифических тестов на сифилис, скрининга сифилиса, обследования контактных лиц и доноров крови.

Люэс, бледная трепонема.

Синонимы английские

Syphilis, passive hemagglutination test; Syphilis, indirect hemagglutination test; Treponema Pallidum Hemaglutination Assay, TPHA.

Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА).

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

Не курить в течение 30 минут до сдачи крови.

Общая информация об исследовании

Сифилис – инфекция, передающаяся половым путем, возбудителем которой является спирохета Treponema pallidum subspecies pallidum. Попадание этой бактерии в организм приводит к развитию иммунного ответа, сопровождающегося выработкой как неспецифических («нетрепонемных»), так и специфических («трепонемных») антител. Выявление антител к T. pallidumсоставляет основу лабораторного подтверждения сифилиса. В зависимости от типа антител, определяемых в реакции, серологические исследования разделяют на неспецифичексие («нетрепонемные») и специфичексие («трепонемные»). Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА) относится к «трепонемным», то есть специфическим в отношении T. pallidum тестам.

РПГА основана на феномене агглютинации эритроцитов, на поверхности которых адсорбированы антигены T. pallidum (реагент РПГА), при добавлении к ним сыворотки больного сифилисом, содержащей специфические антитела к спирохете. Такие антитела появляются в крови пациентов с сифилисом через 2 (IgM) и 4 (IgG) недели после инфицирования. Следует отметить, что этот период может удлиняться до 6 недель. Поэтому чувствительность РПГА в первичном периоде сифилиса несколько уступает чувствительности этого метода во вторичном и третичном периодах и составляет около 86 %. Преимуществом РПГА является высокая специфичность (96-100 %), позволяющая использовать этот анализ в качестве подтверждающего теста после положительного результата какого-либо неспецифического, «нетрепонемного» исследования (например, антикардиолипинового теста, RPR). Чувствительность РПГА во вторичном, третичном периоде сифилиса, а также при скрытом сифилисе составляет 99-100 %.

Чувствительность РПГА и других «трепонемных» тестов превосходит чувствительность неспецифических («нетрепонемных») тестов, таких как микрореакция преципитации (МРП) с кардиолипиновым антигеном. Поэтому в последнее время в качестве скринингового теста на сифилис стали чаще применять «трепонемные» тесты, в том числе РПГА. При положительном результате скринингового исследования на сифилис с помощью РПГА следует провести подтверждающий тест. В этом случае им является любой другой «трепонемный» тест, но не РПГА (например, иммуноферментный анализ).

Учитывая эти особенности, результат РПГА следует интерпретировать с учетом дополнительных анамнестических и лабораторных данных. При подтверждении диагноза «сифилис» необходимо исключить наличие других инфекций, передающихся половым путем, а также обследовать всех половых партнеров и членов семьи пациента.

Для чего используется исследование?

Чтобы подтвердить диагноз «сифилис» при положительном результате неспецифического скринингового теста;
для скрининга сифилиса;
для обследования лиц, находившихся в половом и тесном бытовом контакте с больным сифилисом;
для исключения сифилиса у донора крови.

Когда назначается исследование?

пациента с клиническими признаками сифилиса (безболезненный эрозивный или язвенный дефект на твердом основании) и регионарной лимфаденопатии (первичный сифилис), полиморфная кожная сыпь, многоочаговая или диффузная алопеция, сифилитическая лейкодерма (вторичный сифилис), плотноэластический узел с распадом или формированием «сухого» рубца (третичный сифилис);
лиц, находившихся в половом и тесном бытовом контакте с больным сифилисом;
донора крови;
при ежегодном профилактическом обследовании, госпитализации в стационар, оформлении санитарной книжки.

Что означают результаты?

Референсные значения: отрицательно.

Причины положительного результата:

первичный, вторичный, третичный, а также скрытый сифилис (приобретенный и врожденный);
беременность;
ВИЧ-инфекция;
гепатиты В и С;
употребление инъекционных наркотиков;
острый инфаркт миокарда;
диффузные заболевания соединительной ткани;
возвратный тиф;
лептоспироз;
клещевой боррелиоз;
тропические трепонематозы (фрамбезия, беджель, пинта);
воспалительные процессы, обусловленные сапрофитными трепонемами полости рта и гениталий;
злокачественные новообразования;
обширная травма и переломы;
бактериальный эндокардит;
туберкулез;
инфекционный мононуклеоз;
поствакцинальная реакция.

Причины отрицательного результата:

отсутствие сифилиса;
первые 2-4 недели после инфекции T. pallidum;
неправильное взятие материала на исследование.

Что может влиять на результат?

Результат анализа может быть ложноотрицательным в течение первых 2-4 (до 6) недель после заражения.

Исследование не позволяет дифференцировать;
- сифилис (T. pallidum) и другие трепонематозы (T. pallidumsubspeciespertenue, endemicum, carateum);
- ранний и поздний сифилис.
Исследование не предназначено для контроля лечения сифилиса.
Результат анализа следует оценивать вместе с дополнительными анамнестическими, лабораторными и инструментальными данными.

Сифилис RPR (антикардиолипиновый тест / микрореакция преципитации), титр
Treponema pallidum, IgM, титр
Treponema pallidum, IgG, титр
Treponema pallidum, IgG вликворе
Treponema pallidum, антитела
HIV 1, 2 Ag/Ab Combo (определение антител к ВИЧ типов 1 и 2 и антигена p24)
Вирусный гепатит B. Контроль активности вируса перед началом лечения
Вирусный гепатит C. Анализы для первичного выявления заболевания. Обследование контактных лиц
Интимный – оптимальный – анализ мазка у мужчин
Интимный – оптимальный – анализ мазка у женщин
Госпитализация в хирургический стационар
Госпитализация в терапевтический стационар

Кто назначает исследование?

Дерматовенеролог, невролог, врач общей практики, эпидемиолог.

Литература

French P, Gomberg M, Janier M, Schmidt B, van Voorst Vader P, Young H; IUST. IUSTI: 2008 European Guidelines on the Management of Syphilis. Int J STD AIDS. 2009 May;20(5):300-9.
Seña AC, White BL, Sparling PF. Novel Treponema pallidum serologic tests: a paradigm shift in syphilis screening for the 21stcentury. Clin Infect Dis. 2010 Sep 15;51(6):700-8.
Luger A. Diagnosis of syphilis. Bull World Health Organ. 1981;59(5):647-54.
Holmes K.K. Sexually Transmitted Diseases / K.K. Holmes, P.F. Sparling, W.E. Stamm; 4th ed. — McGraw-Hill, 2008.

первичный, вторичный, третичный, а также скрытый сифилис приобретенный и врожденный ;.

Показания к тестированию

В целях профилактики медики рекомендуют сдавать кровь на РПГА каждый год. Абсолютными показаниями к проведению такого тестирования являются:

проявление симптомов сифилиса. Основные признаки этого заболевания – возникновение эрозий и язв на кожном покрове (в особенности в области половых органов), увеличение лимфоузлов, частичное поредение волосяного покрова;
появление симптомов алопеции разных видов (патологическое облысение);
незащищенный половой контакт с предполагаемым носителем болезни.

Также тестирование в обязательном порядке назначается людям, которые хотят сдавать кровь как доноры. Кроме вышеперечисленных ситуаций, подобный анализ назначается при оформлении медкнижки и при определении человека в стационар. Также медик может выписать направление на РПГА анализ при подозрении на дифтерию, дизентерию или сальмонеллу.

Также тестирование в обязательном порядке назначается людям, которые хотят сдавать кровь как доноры.

Как долго проводится анализ?

Точно сказать, как долго делается расшифровка результатов, невозможно. Скорость ее зависит от самого типа исследования, а также от применяемого оборудования.

Чаще всего РПГА расшифровывается в течение суток, но в некоторых случаях процедура может занять от 2 до 4 дней. Если лаборатория будет сильно загружена, пациенту выдадут бланк с результатами не раньше чем через 5 суток.

Если лаборатория будет сильно загружена, пациенту выдадут бланк с результатами не раньше чем через 5 суток.

Возбудитель сифилиса (Treponema pallidum), полуколичественное определение антител в реакции пассивной гемагглютинации

Не менее 3 часов после последнего приема пищи. Можно пить воду без газа.

Метод исследования: РПГА

Сифилис — инфекционное заболевание, вызываемое бледной трепонемой (Treponema pallidum), передаваемое преимущественно половым путем. Заболевание характеризуется поражением кожи, слизистых оболочек, нервной системы, внутренних органов и опорно-двигательного аппарата, может протекать в скрытой форме. Продолжительность инкубационного периода в среднем составляет от 2 недель до 2 месяцев.

В диагностике заболевания применяют прямые методы (обнаружение возбудителя или его ДНК) и косвенные методы лабораторной диагностики (выявление в крови специфических антител).

Косвенные методы определения подразделяются на нетрепонемные (RPR, РМП) и трепонемные (ИФА, ИХЛА, РПГА, РИФ, иммуноблотинг).

РПГА – трепонемный тест определения антител к Treponema pallidum, используется в качестве скринингового и подтверждающего теста для диагностики сифилиса. Полуколичественный метод РПГА позволяет оценить уровень специфических трепонемных антител в крови.

Можно пить воду без газа.

Как долго проводится анализ?

Число склеенных эритроцитов во многом зависит от того, какое количество антител присутствует в реагенте.

3. Тесты на сифилис с использованием рекомбинантных антигенов

Антигены для данной группы тестов получают генно-инженерным путем и используют в реакциях — РПГА и ИФА, в анализах иммуноблоттинга (ИБ) и иммунохроматографическом анализе.

Рис. 3. Для диагностики сифилиса используется комплекс серологических тестов.

С ее помощью выявляются антитела в сыворотках, где реакция Вассермана дала отрицательный результат.

Метод исследования

острый инфаркт миокарда;.

Общая характеристика РПГА

Эта реакция была изобретена еще в 1965 году. По классификации, относится к непрямым трепонемным пробам, которые позволяют только косвенно судить о наличии возбудителя в организме пациента. Обладает высокой чувствительностью и специфичностью. Принцип непрямой гемагглютинации основан на том, что белки (антигены) бледной трепонемы заранее абсорбированы на эритроцитах какого-либо животного или птицы. Если эту «меченую» сыворотку смешать с плазмой крови больного, то антитела пациента распознают свою мишень и сработают: эритроциты склеятся (агглютинируют) боковыми сторонами.

У здорового человека такой реакции не произойдет. Красные кровяные тельца играют здесь только сигнальную роль. Благодаря им, результат можно оценить даже без микроскопа.

Полученный материал помещают в термостат на 30-60 минут при 37 С.

Подготовка к исследованию

Чтобы тест показал достоверные результаты, пациент должен провести несложную подготовку к РПГА.

Перед сдачей крови для анализа методом пассивной гемагглютинации требуется:

за трое суток до посещения лаборатории полностью исключить употребление алкогольных напитков любой крепости. Даже небольшое содержание спирта в организме приведет к получению искаженных результатов, затрудняющих диагностику. Чтобы не пропустить патологию или не поставить диагноз сифилис здоровому человеку, в этом случае потребуется проведение дополнительного обследования;
за три дня до анализа избегать физического переутомления, а также любого психоэмоционального напряжения;
за сутки до сдачи крови исключить употребление в пищу жирной и жареной пищи. «Тяжелое» питание будет способствовать изменениям показателей анализа;
за 12 часов до посещения лаборатории нужен полный отказ от употребления любой еды;
для получения достоверного результата в день исследования запрещается курить, пить чай, кофе и другие напитки.

В день сдачи анализа разрешается только выпить немного чистой негазированной воды без вкусовых добавок.

Выписывая направление на РПГА крови на сифилис, врач должен подробно рассказать пациенту о правилах подготовки к анализу, поставить в известность о возможности получения ложноположительных или ложноотрицательных результатов. В таких случаях потребуется повторная сдача крови в лабораторию для получения контрольных результатов.